血小板生成素受体((myeloproliferative leykemia，Mpl)是Ⅰ类细胞因子受体，它属于造血受体超家族。Mpl最初被确认是骨髓组织增殖白血病(myeloproliferative leukemia virus，MPLV)的癌基因。被MPLV感染的动物出现系统的异常扩增，包括红细胞系统，骨髓系统和巨核细胞系统，最终导致造血失败。有的将相应的原癌基因克隆到人类红白血病细胞系。根据预测的癌基因和原癌基因的一级序列，有人猜测它们编码一种造血生长因子受体。而配体TPO的发现很好地证实了这种假设。TPO是血小板生成素，是Mpl的配体。之后很多独立的研究小组同时分离和克隆了TPO。 本实验室利用酵母双杂交系统(Yeast two hybrid system)，以Mpl的胞外区域为诱饵，筛选人胎肝cDNA文库，获得的一个与Mpl相互结合的蛋白，序列分析表明该蛋白为人核迁移蛋白hNI-IDC(human nuclear distribution protein C，hNUDC)。通过一系列的体内体外实验，证明该蛋白为Mpl的另一枚配体。我们通过ELISA和免疫荧光实验观察到hNUDC与细胞表面捕获的Mpl直接结合，而且，用pMpl-EGFP稳定转染后的NIH 3T3细胞内，hNUDC能引发细胞形态的显著改变。值得一提的是，这些形态学变化具有巨核细胞分化过程中的形态特点。据报道，这些类巨核细胞分化的现象有胞外信号调控蛋白激酶1和2(ERK1/2)调节。 在这项研究中，我们进一步设计了表达血小板生成素(Mpl)的-依赖于红细胞生长素的UT-7细胞系，比较了hNUDC和TPO的生物学功能。首先，我们构建了pcDNA-Mpl表达载体，并且得到稳定表达Mpl蛋白的UT-7/EPO细胞。我们通过MTT等方法检测UT-7/EPO-Mpl的增殖和存活效果；并且用Gimesa染色法检测细胞形态的变化；用流式细胞仪检测细胞的周期变化和巨核细胞特异性表面抗原CD41的表达情况。这些表达Mpl的细胞在hNUDC或TPO的刺激之后展现了巨核细胞增殖和分化交叠出现的形式，具体表现是细胞形态学的变化、多倍体和CD41(+)的表达。 细胞在无血清的情况下用hNUDC或TPO刺激不同的时间。或者在抑制剂PD98059或SB203580抑制下半小时，将细胞裂解，细胞裂解液用SDS-PAGE电泳，用抗ERK1/2或抗p38MAPK的多克隆抗体进行Westorn Blot检测。加入PD98059或SB203580抑制剂抑制细胞的增殖和分化，使用的方法和前面的一致。与TPo相似，hNUDC诱导细胞外信号调节蛋白激酶1和2(ERK1/2)，以及p38有丝分裂原激活激酶(p38 MAPK)的持续激活，然而，这些效应可以被PD98059或SB203580抑制。进一步的试验发现PD98059或SB203580抑制了hNUDC或TPO诱导的细胞增殖和分化，这就预示着ERK1/2和p38 MAPK通路是巨核细胞发育必不可少的。 总之，本文研究了Mpl与hNUDC在细胞中的相互作用影响，可为进一步研究巨核细胞分化发育及血小板产生的作用机制，提供实验和理论依据。