【摘 要】
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虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)是一种重要的经济贝类,广泛分布在日本北部岛屿的沿岸,朝鲜半岛北部,库页岛以及北方四岛。1982年,由日本引进到中国,由于其具有个体大,市
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虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)是一种重要的经济贝类,广泛分布在日本北部岛屿的沿岸,朝鲜半岛北部,库页岛以及北方四岛。1982年,由日本引进到中国,由于其具有个体大,市场价值高等特点,在大连等地区很快成为一种重要的贝类养殖品种。最近十年,虾夷扇贝出现了成长速度慢,苗产量低及大规模死亡等问题,使虾夷扇贝养殖业受到了巨大的经济损失,严重制约了我国贝类产业的发展。然而,对贝类免疫系统的探索、简单介绍MyGPx基因有助于我们有效的控制扇贝疾病,从而更好的发展贝类养殖业。本文采用基因克隆的方法,以虾夷扇贝外套膜cDNA为模板,利用RT-PCR和RACE技术得到了虾夷扇贝谷胱甘肽过氧化物酶(MyGPx)全长cDNA序列(基因登录号:HQ433529)。MyGPx基因全长1081bp,包括28bp的5′非编码区,603bp开放阅读框和含有加尾信号(AATAAA)的450bp3′非编码区。多序列比对结果显示,MyGPx的编码序列与其他无脊椎动物和脊椎动物的硒依赖GPx有着很高的相似性。进化分析显示虾夷扇贝、双壳类浦珠母贝、三角帆蚌的GPx都与GPx1和GPx2有着很高的同源性。通过基因步移方法,获得了1686bp的基因序列,该序列包括58bp MyGPx cDNA序列,1628bp的5’侧翼区。使用TRANSFAC和AliBata 2.1软件预测出MyGPx 5′侧翼序列中含有的假定转录因子结合位点。通过比对15个扇贝MyGPx的5′侧翼序列,发现了9个假定SNP位点,这些SNP位点的发现为虾夷扇贝的分子育种提供了更多潜在的分子标记位点。通过实时定量PCR技术分析了MyGPx在不同组织,不同胚胎发育阶段以及鳗弧菌(Vibrillo anguillarum)刺激后各时间段的相对表达量。研究发现MyGPx在成体中外套膜表达量最高,在10个胚胎发育时期中担轮幼体时期表达量最高,菌刺激12小时实验组与对照组的表达量差异最大。我们可以推论,GPx可能是一种重要的生长因子和免疫因子,在虾夷扇贝的成体组织生长,幼体胚胎发育以及免疫防御中起着至关重要的作用。
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