论文部分内容阅读
羟基喜树碱(Hydroxycamptothecin，HCPT)是从喜树中提取的同类抗肿瘤单体中抗癌作用最强的微量生物碱，临床主要用于肝癌、胃癌、头颈部肿瘤、直肠癌、白血病等恶性肿瘤的治疗，能够延长肿瘤患者的生存时间，降低死亡率。但由于其水溶性差，半衰期短，活性内酯结构易开环及消化道毒性等缺点，往往引起药物抗肿瘤活性降低，给药频繁，胃肠道不良反应严重等临床问题，从而在一定程度上限制了其应用。 本研究采用载药量高，生物相容性好，易于大规模生产的纳米脂质载体(nanostructured lipid carriers，NLC)为载体，并对其进行PEG修饰，设计构建了一种包载HCPT的新型PEG修饰的纳米脂质载体(PEGylated nanostructured lipid carriers，PEG-NLC)，以延长HCPT在体内的循环时间，提高药物对肺癌的治疗效果，降低喜树碱类药物的消化道毒性。本研究主要在以下几个方面进行了系统的研究，并且取得了进展。 1、以荧光物质芘标记纳米粒，考察了纳米粒的PEG修饰及粒径对鼠巨噬细胞RAW264.7摄取的影响。结果表明，以PEG硬脂酸酯修饰的纳米粒可显著降低巨噬细胞对纳米粒的摄取。粒径是影响纳米粒细胞摄取的重要因素，110～210nm的PEG修饰纳米粒可有效避免巨噬细胞的吞噬。 2、以单硬脂酸甘油酯为固态脂质，大豆油为液态脂质，PEG-40硬脂酸酯(PEG分子量2000)及PEG-100硬脂酸酯(PEG分子量5000)为PEG修饰材料，蛋黄卵磷脂EPC为乳化剂，通过考察粒径、粒度分布、zeta电位、包封率等指标，以熔融乳化-高压均质法成功制备了包载HCPT的不同PEG分子量修饰的纳米脂质载体PEG-40NLC及PEG-100NLC。制得产品粒径约为100nm，粒度分布窄且包封率高。并以PVP为支撑剂，制备了PEG-NLC的喷干粉末，在加速及长期试验中放置稳定性良好。 3、以透射电镜(TEM)扫描电镜(SEM)对PEG-NLC进行了形态学研究;DSC及X-射线衍射结果表明PEG-NLC中固态脂质为结晶缺陷型及无定形结构的混合物。通过测定PEG-NLC的固有水化层厚度，PEG链密度及链间距等参数，推测了PEG-40NLC及PEG-100NLC的微观结构。 4、HCPT PEG-NLC与缓冲液及血浆共孵育的结果表明，制剂PEG-NLC对HCPT的内酯结构具有良好的保护作用。 5、大鼠单剂量注射HCPT注射液，载药NLC(非PEG修饰)，PEG-40NLC，PEG-100NLC的药动学结果表明，HCPT注射液在体内快速分布及消除，t1/2只有30min，经小鼠尾静脉注射2h后即检测不到血药浓度;PEG-NLC显著延长了HCPT在体内的循环时间，提高了生物利用度。且PEG-40NLC较PEG-100NLC表现出更良好的长循环效果，这有利于提高作用于细胞周期S期药物(喜树碱类抗肿瘤药物)的疗效。 6、小鼠单剂量注射HCPT注射液，HCPT NLC，PEG-40NLC，PEG-100NLC的组织分布结果表明，NLC，PEG-40NLC，PEG-100NLC显著改变了HCPT的组织分布。未经PEG修饰的NLC在静脉给药时易被单核巨噬细胞系统及网状内皮系统(RES)识别并吞噬，在吞噬细胞比较丰富的肝、脾内高浓度蓄积。PEG-NLC可有效避免RES的吞噬，药物在肝、脾浓度较HCPT-NLC显著降低而在肺部表现出明显的靶向作用。这为PEG-NLC作为肺癌治疗的纳米载体提供了基础。 7、体外培养了人肺腺癌细胞A549，制备了芘标记的NLC、PEG-40NLC及PEG-100NLC，并考察了制剂与人肺腺癌细胞A549共孵育后被细胞摄取的情况。结果表明，芘标记的NLC及PEG-NLC可被A549细胞摄取。A549细胞对三种纳米粒的摄取量排序为:PEG-40NLC＞PEG-100NLC＞NLC。 8、研究建立了人肺腺癌A549裸小鼠移植瘤模型，以相对肿瘤体积(RTV)，相对肿瘤增殖率(T/C)及裸鼠体重变化为考察指标，研究了以生理盐水为阴性对照，尾静脉注射HCPT注射液，载药NLC，PEG-40NLC及PEG-100NLC对A549裸鼠移植瘤的抑制作用。结果表明，HCPT注射液对A549移植瘤抗肿瘤作用不佳;PEG-NLC对可显著提高HCPT对A549移植瘤的抑瘤作用，且PEG-40NLC在药效学实验中表现出最佳的抑瘤效果。 9、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在喜树碱类药物的胆汁排泄方面具有重要作用。伊立替康(CPT-11)及HCPT注射液协同给予具有BCRP抑制作用的小分子抑制剂或辅料时，均会降低CPT-11及HCPT经胆汁的排泄量，改善此类药物引起的腹泻，并且可减小药物对消化道粘膜的损伤。以含有BCRP抑制作用的辅料(PEG-40硬脂酸酯)制成的PEG-40NLC，同样具有降低HCPT胆汁排泄量，改善腹泻及保护消化道粘膜的作用。