几种鳗鲡苗种的种质鉴定及其遗传多样性研究

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鳗鲡具有很高的营养价值和药用价值,为上等的食用鱼,民间作为滋补食品。我国是世界上最大的鳗鲡生产国,鳗鲡产品出口额在单项农产品出口额中占据首位。由于人们对我国沿海日本鳗鲡苗种资源的过度捕捞,导致日本鳗鲡苗种种质资源极度匮乏且供给不稳定,因此最近几年我国引进了新的鳗鲡品种进行养殖。鳗鲡形态十分相似,因此在新品种引进后容易造成种质资源混乱。本研究利用AFLP技术及线粒体DNACOⅠ和COⅡ分子标记技术对几种鳗鲡的苗种进行种质鉴定,并研究几种鳗鲡苗种对高低温的耐受性,以期为鳗鲡新品种的推广养殖提供基础资料。1.以日本鳗鲡(Anguilla japonica)、欧洲鳗鲡(A. anguilla)、美洲鳗鲡(A. rostrata)、印尼鳗鲡(A. bicolor Pacifica)、菲律宾鳗鲡(A. mormorata)五种鳗鲡的幼鳗为实验对象,讨论其对极限高、低温的耐受性及种间差异。实验结果表明:不同种的鳗鲡幼鳗对环境温度的耐受范围具有种间差异。日本鳗鲡、美洲鳗鲡、欧洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡高温“死亡高峰温度”分别为39℃、38℃、37.5℃、39℃、38℃,日本鳗鲡对高温的耐受性最好,欧洲鳗鲡耐受性最差,但种间差异不显著;日本鳗鲡、美洲鳗鲡对低温的耐受性最好,能在冰水混合物中生存,欧洲鳗鲡、菲律宾鳗鲡、印尼鳗鲡对低温耐受性依次减弱,低温“死亡高峰温度”分别为2℃、5℃、10℃。2.利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记技术研究日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、非洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡6种鳗鲡群体的遗传多样性和群体间遗传分化。8对引物在180个个体中共扩增出519个位点,遗传多样性结果显示,6种鳗鲡的多态位点比例(P)介于54.62%-63.85%之间,其中印尼鳗多态位点比例最低为54.62%,欧洲鳗多态位点比例最高为63.85%;平均每位点等位基因数(A)介于1.5462-1.6385之间,平均为1.5918;平均每位点有效等位基因数(Ae)介于1.2657-1.3289之间,平均为1.3040;Shannon氏指数(I)介于0.2520-0.3066之间,平均为0.2810;Nei’s基因多样性指数(H)为0.1632-0.2002,平均为0.1837,说明6种鳗鲡都具有较高的遗传多样性。群体间遗传分化结果显示欧洲鳗与美洲鳗遗传距离(D)最小为0.0543,其次是菲律宾鳗和印尼鳗,遗传距离为0.1253,其余鳗之间的遗传距离介于0.2377-0.3030之间。通过聚类分析结果显示,6种鳗鲡聚为2大类,美洲鳗、欧洲鳗聚为一支然后和非洲鳗再聚为一支,印尼鳗、菲律宾鳗聚为一支然后和日本鳗再聚为另一支。同时利用AFLP技术对6种鳗鲡进行种质鉴定,通过E-AAG/M-CGT和E-AAG/M-CTT两对引物中的5个特异性位点能够对6种鳗鲡进行有效的鉴别。3.对日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、非洲鳗鲡、印尼鳗鲡、菲律宾鳗鲡6种鳗鲡线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和细胞色C素氧化酶亚基Ⅱ(COⅡ)基因片段碱基序列进行比较。6种鳗鲡COⅠ基因片段核苷酸序列均为652bp,6种鳗鲡COⅠ基因片段核苷酸序列共有105bp的差异,其中有18个位点发生碱基颠换,87个位点发生碱基转换;6种鳗鲡COⅡ基因片段核苷酸序列均为412bp,6种鳗鲡COⅡ基因片段核苷酸序列共有46bp的差异,其中6个位点发生碱基颠换,40个位点发生碱基转换。在6种鳗鲡COⅠ和COⅡ基因片段中A、T、G、C含量非常相似,并且A+T的含量都大于G+C的含量。
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