目的:从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选免疫学阳性的编码基因,克隆、表达并进行鉴定,为临床猪囊尾蚴患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原。方法:经确诊脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,阳性克隆经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的DNA片段,并将其克隆入pMD-18T载体中,测序结果与应用EXPASY软件进行分析,获得完整开放阅读框(ORF)基因序列,设计并合成引物PCR法扩增,与T载体连接,转化入XL1-blue大肠杆菌,双酶切鉴定;再将其亚克隆入表达载体pET-28a(+),转化入BL21大肠杆菌,双酶切、测序鉴定后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot方法观察表达结果。结果:经cDNA文库筛选,初步确定NC膜上深黄色单个噬菌斑为阳性克隆;用上下游载体臂上通用引物PCR法扩增出了200～1800bp不同大小的DNA片断;将其克隆入PMD-18T载体,测序结果应用EXPASY软件分析,获得一个681bpORF DNA序列;PubMed中blast程序确定为一个新基因(命名为Ts1),录入号为EU009656;PCR法扩增出了一个681bp左右的DNA片断,将重组质粒pMD-18T-Ts1、pET-28a(+)-Ts1分别作BamHⅠ和HindⅢ双酶切,均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片断,对插入片断的测序结果表明,Ts1具有一个长度为681bp的ORF,编码227个氨基酸,理论分子量25.86kDa,理论等电点(pI)为6.68;用IPTG诱导重组质粒pET-28a(+)-Ts1,产物行SDS-PAGE,可得到一分子量约28.0kDa融合蛋白,Western-blot法鉴定该蛋白能被脑囊尾蚴病人血清所识别。结论:本试验成功地筛选、克隆和表达了猪囊尾蚴Ts1基因,所获得的目的蛋白有望成为猪囊尾蚴病诊断抗原,其免疫学诊断价值值得进一步研究。