【摘 要】
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梨腐烂病是我国梨树上的一种重要的枝干病害,在北方梨产区发病严重的梨园常造成大量死树或毁园,病菌侵染梨树后导致细胞壁降解而表现树皮腐烂症状,但有关梨腐烂病菌果胶酶基
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梨腐烂病是我国梨树上的一种重要的枝干病害,在北方梨产区发病严重的梨园常造成大量死树或毁园,病菌侵染梨树后导致细胞壁降解而表现树皮腐烂症状,但有关梨腐烂病菌果胶酶基因的研究尚未见报道。本研究根据实验室前期获得的梨腐烂病菌强致病力菌株F-HN-6和弱致病力菌株F-HN-2a-1的转录组数据分析,预测获得1个聚半乳糖醛酸酶相对表达量上调的基因Vamepg,通过基因敲除和转化子致病力比较,对Vamepg基因在梨腐烂病菌侵染梨过程中的功能进行了初步研究,取得的主要研究结果如下:1、通过Real-Time PCR验证Vamepg基因的相对表达量,结果表明梨腐烂病菌强致病力菌株F-HN-6 Vamepg基因的表达量为弱致病力菌株F-HN-2a-1的1.86倍,预测分析发现Vamepg基因编码的外切聚半乳糖醛酸酶具有外分泌功能,能够分泌到细胞膜外。2、采用Double-joint PCR方法构建线性敲除载体,利用PEG介导原生质体遗传转化方法,获得能够在含潮霉素的培养基上生长的转化子。分别采用4对检测引物筛选转化子和Southern Blot鉴定为单拷贝,获得4个缺失Vamepg基因的突变体。并利用基因互补方法获得2个Vamepg基因的互补突变体,说明梨腐烂病菌可以采用线性载体利用PEG介导原型质体转化方法进行基因敲除。3、缺失Vamepg基因的突变体在PDA培养基上生长速度略微降低,分生孢子器大小及形态无差异,但在枝条上的致病力显著降低。Vamepg基因的互补突变体的生长速度和致病力与野生型菌株相比基本相同。体外酶活力测定发现,野生型菌株在培养过程中酶活力不断增强,在10d时酶活力达到最大值;缺失Vamepg基因的突变体菌株体外酶活力一直维持在较低水平,在10d时酶活力未出现最大值。推测缺失Vamepg基因可能导致突变体分泌的外切聚半乳糖醛酸酶含量减少,从而减弱其对梨树枝条的致病力。
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