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天然存在的羧肽酶B是一种以锌离子为辅因子的外肽酶，它可以特异性切除肽链C-端的碱性氨基酸，如精氨酸、赖氨酸或鸟氨酸。羧肽酶B在商业和科研上有着很广泛的用途，但其胰脏来源使得市场价格昂贵。我们成功实现了羧肽酶B在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式的高效表达，并对表达获得的包涵体进行了变复性研究。
用逐步优化的方法确定了重组羧肽酶B的变性条件：10mol/L尿素，或者50mmol/L，K2HPO4-K3PO4(pH12)加1mol/L，尿素均可达到较好的包含体溶解效果；优化了重组羧肽酶B的复性条件，确定复性体系为：含有1mmol/L GSH，1mol/L尿素的0.1mol/LGly-NaOH(pH9.5)缓冲液，Zn2+与蛋白(摩尔)浓度比为1000：1，复性液蛋白浓度为200μg/mL；绘制了重组羧肽酶B的复性动力学曲线。另外，利用紫外全波长扫描和圆二色谱技术对尿素对重组羧肽酶B(纯酶)的结构及酶活力的影响做了初步研究。
将羧肽酶B分子中的游离半胱氨酸Cyt288进行了点突变，构建了含有表达质粒pET-22b-mproCPB和pET-22b-mCPB两株突变菌，并获得了成功表达。