柑橘成年态组织培养及脱毒方法的研究

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目前我国柑橘黄龙病的防治主要依靠传统方法:砍除病树,控制木虱和培育无病毒苗木。本试验主要将药剂处理与传统脱毒方法相结合,并通过柑橘成年态茎段培养、微芽嫁接方法获得无病毒苗木,具体研究内容如下:1、成年态培养产生多重芽。试验中探讨了清家脐橙成年态茎段不同消毒方式的污染率和成活率、不同激素配比下产生的多重芽数,结果表明:10%体积比的Na Cl O消毒30 min,间隔2 h再次采用10%Na Cl O消毒20 min消毒效果最佳;MS培养基附加2.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA产生的多重芽数最多,平均达3.97个,利用率稍低;MS培养基附加1.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L NAA产生的多重芽数平均达2.57个,芽的形态正常,利用率较高。2、抗生素处理柑橘植株脱毒试验。利用广谱抗生素甲硝锉与芬布芬复合剂200mg/L、盐酸特比萘芬100 mg/L、奥硝唑200 mg/L对离体纽荷尔植株浸泡1 h进行处理能较好的抑制黄龙病的发展;使用抗生素头孢菌素、氟喹诺酮、青霉素200 mg/L浓度对绿橙活体植株进行12个周期,每5天一个周期的处理,得到脱毒率分别为50%、75%、50%,以上三种抗生素组合处理,脱毒率为100%。说明使用争对革兰氏阴性菌的抗生素对柑橘黄龙病菌进行处理有很大的应用前景。3、采用微芽嫁接方法获得无毒苗。通过微芽嫁接共获得52株成活植株,其中有三种来源的接穗,即成年态培养产生的多重芽、离体枝条药剂处理芽、当季普通芽。嫁接成活植株包含12个品种,其中翡翠柚、纽荷尔脐橙、大浦(温州蜜柑)三个品种的成活率稍高于其他品种,成活率分别为6.36%、5.53%和5.44%。通过对28株嫁接成活植株为期8-12个月的培养,取叶片检测得出脱毒率为89.29%。4、采用亚洲种黄龙病16S rDNA区引物对OI1/OI2c对海南样DNA进行扩增并测序,分析表明,海南琼中绿橙样分离物在16S r DNA区序列与日本冲绳株系遗传距离最近,同源性达99%。5、连续2年对海南琼中地区大量样品黄龙病和衰退病的检测,得出:黄龙病检出率为41.2%,衰退病检出率为92.5%,说明黄龙病和衰退病危害严重。调查主要原因是果农在实际销毁病树过程中因为不舍得砍掉部分感染的病树而因小失大,导致大面积的果树感染。
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