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目的:检测GPR30在大鼠不同发育阶段中的表达,探讨GPR30在大鼠卵泡生长发育、成熟,黄体的形成、维持及退化中的作用。
方法:本研究以雌性Sprague Dawley(SD)大鼠为实验对象。新生大鼠模型选用出生后d5、d7、d10、d15、d21、d28的大鼠。激素诱导未成年大鼠模型,d25大鼠注射PMSG(50IU),2天后注射hCG(30IU)。分别在注射PMSG后0天(c1)、第1天(p1)、第2天(p2)以及注射hCG后的第1天(ph1)、第3天(ph3)、第7天(ph7)、第11天(ph11)处死大鼠,取出双侧卵巢。性成熟后有正常动情周期的大鼠,分别在动情间期、动情前期、动情期和动情后期处死大鼠,取出双侧卵巢。运用免疫组织化学方法检测GPR30在大鼠卵巢中的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GPR30 mRNA在大鼠卵巢中的表达水平;采用免疫印记(Western blot)检测GPR30蛋白在大鼠卵巢中的表达水平。
结果:(1)新生大鼠模型结果显示:GPR30表达于原始卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡,主要位于卵母细胞和颗粒细胞。从d5到d28均有GPR30的表达,d5表达很少,然后表达呈上升趋势,d21达到峰值,d28下降。(2)激素诱导未成年大鼠模型显示:从c1组到ph11组均检测到GPR30的表达,主要位于卵母细胞、颗粒细胞、卵泡泡膜细胞和黄体细胞。c1组GPR30表达很少;p1和p2组GPR30的表达明显增加,p2组表达最多;Ph1组GPR30的表达有所下降;ph3组表达升高;ph7、ph11组表达下降。(3)动情周期大鼠模型结果显示:间期、前期、情期、后期四期均有GPR30的表达,主要表达于卵母细胞、颗粒细胞、卵泡泡膜细胞,卵巢间质可见少量表达,GPR30的表达水平从间期到情期逐渐增加,到情期达到最大值,后期表达下降。
结论:GPR30参与了卵泡的生长发育、成熟,黄体的形成、维持及退化的生理过程。