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目的：人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)已被证实是诱发子宫颈癌的病因。其早期区基因E6和E7参与病毒自我复制、转录以及肿瘤形成,故已成为了治疗子宫颈癌的理想靶位目标。本研究通过计算机软件筛选出HPV58 E6和E7的HLA-A2限制性细胞毒性的T淋巴细胞(Cytotoxic lymphocyte, CTL)抗原表位,并进行合成以及免疫反应性的鉴定,为HPV58表位疫苗制备及其他包含HPV58 E6和E7基因疫苗检测提供了候选表位抗原。方法：1.表位抗原的预测及其体液免疫反应鉴定：通过国内外各文献中提供的检测表位抗原网站及软件,对HPV58 E6和E7的表位抗原多肽的预测及筛选,并借助于公司对该表位抗原进行合成及纯化,将筛选出来的5条HPV58 E6多肽(分组命名为P61-P65)、以及3条HPV58 E7多肽(分别命名为P71-P73)、阴性肽段组P0、单纯弗氏不完全佐剂组P1与空白PBS对照组P2均进行相应的分组,并分别于第1、8、15天注射1次,在小鼠尾静脉注射,进行小鼠免疫实验,然后以筛选出来的表位抗原分别包被酶联板,以免疫后小鼠的血清作为一抗,以羊抗鼠的IgG作为二抗,以四甲基联苯胺(Tetramethyl benzidine, TMB)作为反应底物,分别在酶标仪上450nm波长测其吸光度OD值,最后根据其抗体滴度间接定性地检测多肽的体液免疫性。2. ELISPOT酶联斑点试验：提取免疫后小鼠的脾脏,进行淋巴细胞的提取,利用酶联板上原已包被好的抗IFN-γ抗体捕获提取的淋巴细胞分泌的IFN-γ,并以酶联斑点显色方式将其表现出来,再通过公司进行斑点数目的读板,通过斑点的数目来间接反应被激发的特异性T淋巴细胞的数目。3.LDH法细胞毒T细胞杀伤实验：提取并培养免疫后小鼠的淋巴细胞,并将其作为效应细胞,以已标记的C33A/LV-HPV58E6E7细胞作为靶细胞,效应细胞攻击靶细胞,导致靶细胞损伤,并且释放出乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase,LDH),最后实验组结果与靶细胞对照孔对比,用比色的方法来测定LDH活性的比较,以此方法来计算效应细胞对靶细胞的杀伤力,进而判断效应T细胞的CTL活性。结果：1.综合文献以及网站的分析,得出以下关于HPV E6基因的5条9肽表位抗原以及E7基因的3条多肽(分别命名为P61.P62.P63.P64. P65.P71.P72和P73) P61:HPV58 E611.19:TLHDLCQAL； P62:HPV58 E695-103:CLNEILIRC； P63:HPV58 E618-26:ALETSVHEI； P64:HPV58 E665-73:VCLRLLSKI；P65:HPV58 E699-107:ILIRCIICQ；P71:HPV58 E769-77: CINSTTTDV； P72:HPV58 E714-22:DLHPEPTDL； P73:HPV58 E772-80: STTTDVRTL:以上8条多肽均有可能成为HPV58 E6和E7的优势表位抗原；在小鼠末次免疫第7天,将E6的5条多肽组、E7的3条多肽组、阴性肽组、佐剂组与PBS组都分别包被酶联板,实验组小鼠E6组的P62-P65组和E7组的P71-P73的血清抗体滴度均呈现阳性结果,其血清的抗体效价均为1：1600(P<0.05),末次免疫第21天,E6组的P61-P65组和E7组的P71-P73均出现阳性结果,P61血清抗体效价为1：1600,而P62-P65以及P71-P73血清抗体效价均为1：3200,两次血清ELISA显示阴性肽段组P0、单纯佐剂组P1以及PBS空白组PBS P2均呈现阴性结果(P<0.05),实验组P61-P65、P71-P73与阴性组P0、两组对照组P1、P2比较均有显著性差异,具有统计学意义。2.ELISPOT斑点实验结果：将各组末次免疫第14天的小鼠进行提取淋巴细胞实验后分别进行斑点实验,结果显示P62、P63、P64和P73组的小鼠均可检测到特异性的T细胞免疫,IFN-γ分泌细胞形成的斑点数分别为3.2*107个脾细胞、3.05*107个脾细胞、1.26*107个脾细胞和2.66*107个脾细胞,而P61.P65.P71.P72.阴性组P0、单纯佐剂组P1以及PBS空白组P2均没有特异性斑点出现(P<0.05),实验组P62、P63、P64和P73组与对照组的比较均有显著性的差异,具有统计学意义。3.LDH法细胞毒T细胞杀伤实验结果：实验组的小鼠末次免疫第14天,实验组只有3条多肽P62:HPV58 E695-103:CLNEILIRC; P63:HPV58 E618-26: ALETSVHEI; P64:HPV58 E665-73:VCLRLLSKI;能够激起小鼠的特异性CTL免疫反应,说明了P62、P63以及P64组的多肽为HPV 58 E6和E7蛋白的有效CTL表位。结论：HPV58 E695-103. HPV58 E618-26和HPV58 E665-73具有较强的免疫原性,能够有效的诱发免疫后小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,可成为针对HPV58型感染的表位疫苗制备及其他包含HPV58 E6和E7基因的治疗性疫苗检测的候选多肽表位抗原。