【摘 要】
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本研究首先利用转座子Tn5gusA5对重组质粒pGXN201进行诱变,获得3.4kbEcoRI片段插入了Tn5gusA5的突变质粒pGXN215、pGXN216、pGXN217。对这些突变质粒进行亚克隆及测序分析并与
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本研究首先利用转座子Tn5gusA5对重组质粒pGXN201进行诱变,获得3.4kbEcoRI片段插入了Tn5gusA5的突变质粒pGXN215、pGXN216、pGXN217。对这些突变质粒进行亚克隆及测序分析并与基因库中已报道的慢生型大豆根瘤菌的DNA序列作比较,发现突变质粒pGXN217中Tn5gusA5恰好插入在一个未知功能的开放阅读框架内。将pGXN201的3.4kb EcoRI片段与M13作连接,获得亚克隆pGXN201C,对pGXN201C进行测序分析,发现与基因库中已报道的慢生型大豆根瘤菌的DNA序列有95%的同源性。随后,利用突变质粒pGXN217诱变慢生型大豆根瘤菌菌株GX201,获得了GX201的突变体菌株GX217;将pGXN201的3.4kbEcoRI片段与pLARF3连接获得亚克隆pGXN201cl,然后将pGXN201cl导入突变体菌株GX217,构建了GX217的功能互补菌株rGX217。 通过对野生型菌株GX201,突变体菌株GX217及其功能互补菌株rGX217进行植株试验,发现突变体菌株GX217在结瘤时间方面较野生型菌株GX201慢一天,其结瘤效率及竞争结瘤能力均比GX201明显降低。我们认为在突变体菌株GX217中Tn5gusA5所插入的开放阅读框架是一个新的与竞争结瘤有关的基因。
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