目的：构建携带人 EZH2基因编码区（coding region）及3′非翻译区（3′untranslated region,3UTR）与红色荧光（red fluorescent protein,RFP）融合蛋白重组慢病毒表达载体pLVX-DsRed2-EZH2-CDS-3UTR，使RFP-EZH2融合蛋白在人胚肾上皮细胞系293T细胞中稳定表达。　　方法：1.根据In-Fusion技术原理,克隆引物设计时,在EZH2基因同源序列的两侧分别引入15个碱基，其分别来自于经BamH I和Xba I限制性内切酶线性化载体pLVX-DsRed2-N1的两端，使克隆引物外侧的15个碱基与线性化载体两端的15个碱基序列同源，将以此引物扩增的聚合酶链式反应（PCR）产物与线性化pLVX-DsRed2-N1用In-Fusion重组酶在37℃作用30min,使 EZH2特异性扩增产物两端的序列与线性化载体两端的序列发生同源重组,进行转化,挑取阳性克隆,进行菌落PCR和测序鉴定。2.应用脂质体介导的转染技术将鉴定正确的阳性克隆质粒瞬时转染293T细胞，倒置荧光显微镜下观察 RFP红色荧光，检测转染效率，Western blotting检测 RFP-EZH2融合蛋白能否在293T细胞中表达。3.将重组质粒与慢病毒包装系统混合质粒用脂质体法共同转染293T包装细胞，包装成慢病毒。实时荧光定量PCR检测病毒滴度。4.将包装好的慢病毒，感染293T细胞，嘌呤霉素筛选后获得稳定表达株。5.Western blotting检测293T稳定细胞株内RFP-EZH2融合蛋白的表达。　　结果：1.构建出携带人EZH2基因编码区及3′非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体，测序证实所获取基因序列完全正确。2.重组慢病毒表达载体经脂质体转染293T细胞后，荧光显微镜下可观察到表达 RFP的细胞发出红色荧光，转染效率可达85％。Western blotting检测证实RFP-EZH2融合蛋白可在293T细胞表达。3.实时荧光定量 PCR检测病毒滴度为1.59×109 IU/ml。4.嘌呤霉素筛选出稳定表达EZH2基因编码区及3′非翻译区的293T细胞。5. Western blotting均检测293T稳定细胞株内有RFP-EZH2有表达。　　结论：成功构建了含有携带人EZH2基因编码区及3′非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体并包装出携带相应基因的慢病毒且该病毒感染293T细胞后,经嘌呤霉素筛选出稳定细胞株，其 RFP-EZH2可在293T细胞中稳定表达。为研究 EZH2基因生物学功能奠定前期实验基础，同时也为进一步分析可能调控EZH2基因编码区及3′非翻译区表达的miRNA奠定前期实验基础。