中华按蚊是中国以及东南亚等国家主要的疟疾传播媒介之一,有效防控中华按蚊,切断其传播途径,是该地区控制疟疾的关键。抗击疟疾主要的方法是利用杀虫剂对媒介蚊虫进行控制,但随着杀虫剂的大量使用导致蚊虫的抗药性明显增强,因此迫切需要新型的蚊虫防控策略。随着分子生物学的发展、基因工程技术的完善以及中华按蚊基因组、转录组数据的释放,使得利用转基因以及CRISPR/Cas9基因编辑技术进行蚊虫遗传控制已成为可能。转基因和CRISPR/Cas9技术已成功运用于多种蚊虫,但是在中华按蚊中还无相关报道。本研究旨在建立中华按蚊卵的显微注射方法、建立中华按蚊转基因和CRISPR/Cas9技术体系,为中华按蚊的基因功能研究和基于基因驱动的遗传控制奠定基础。主要研究的技术体系如下:(1)中华按蚊卵的显微注射将所需要的各种设备进行搭配,组装成了一套适合卵收集、排列和注射的显微注射系统,并在此基础上对注射参数、注射方法等进行摸索和优化,建立了适用于中华按蚊卵显微注射的硬件条件和注射方法。中华按蚊卵的显微注射技术的建立为转基因、CRISPR/Cas9等技术的应用奠定了基础。(2)中华按蚊转基因技术体系的建立基于已经建立的中华按蚊卵显微注射技术体系,通过注射p Bac[3x P3-EGFP afm]转基因载体和phsp-p Bac辅助质粒建立了中华按蚊的转基因技术体系,包括卵的显微注射、转基因的筛选、插入位点分析和纯合品系建立等。成功建立了两个纯合的EGFP转基因品系,转化率为21.43%。在此基础上,建立了在中华按蚊卵巢中特异表达Cas9基因的转基因品系,为完善中华按蚊的CRISPR/Cas9基因编辑技术体系奠定了基础。(3)中华按蚊CRISPR/Cas9技术体系的建立通过在线软件对中华按蚊As Yellow和As OR7基因的sg RNA靶位点进行分析,并采用注射sg RNA和Cas9蛋白的方式首次实现了CRISPR/Cas9介导的中华按蚊基因组编辑,建立了中华按蚊的CRISPR/Cas9技术体系。对As Yellow和As OR7基因的靶位点进行分析,都有碱基的插入或缺失而导致的移码突变,突变率分别为8%和18.75%。对潜在的脱靶位点进行分析,未发现非特异性的突变。