乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen,HBsAg)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)的重要结构蛋白之一,能诱导机体产生保护性免疫应答。有研究表明,HBsAg变异会影响HBsAg的空间结构,导致sAg在细胞内的分布异常,最终引起分泌缺陷,造成内质网压力,影响HBV感染病程。为此,我们对几种代表性的氨基酸突变HBsAg进行了亚细胞定位分析;由于传统免疫荧光染色方法观察一些特殊的氨基酸突变时仍然存在局限性,我们又进一步构建了荧光蛋白示踪:HBsAg的质粒系统,并利用该系统更好地观察到了突变HBsAg在细胞内的分布。　　 第一章引言部分首先概述了HBV的发现、病毒结构组分以及其生活周期等;其次阐述了HBsAg的结构及S基因突变产生的效应;再者介绍了本研究中所涉及到的信号肽及荧光蛋白的相关信息;最后对本研究的意义作了简要阐述。　　 第二章主要研究了本室已构建的122及145位点不同类型HBsAg氨基酸取代的亚细胞定位。结果发现,G145I、G145P、G145D、G145W和G145R的荧光强度明显减弱,而K122I甚至检测不到明显荧光,提示这些突变削弱了HBsAg与单抗的抗原反应性:G145I、G145E和G145W的荧光呈现明显点状聚集的现象,提示HBsAg分布异常。因此,氨基酸侧链基团的理化性质除了影响HBsAg的抗原性之外,也可能影响HBsAg在细胞内的定位。　　 由于目前还没有一个HBsAg的抗体可以很好地检测到所有突变型HBsAg蛋白,因此,在第三章中利用荧光蛋白mCherry构建了一个HBsAg示踪系统ptMH。研究证实该系统可以形成具有功能的融合蛋白并将其分泌到细胞外,荧光蛋白mCherry可以定位所融合的HBsAg,而且融合蛋白mCherry-HBsAg仍能形成亚病毒颗粒。　　 第四章进一步用上述HBsAg示踪系统观察了突变HBsAg的细胞内分布。研究首次观察到K122I突变型HBsAg的细胞内定位,并呈现绕细胞核环状分布及细胞质内点状聚集分布趋势,其他突变型HBsAg的亚细胞定位情况与免疫荧光染色结果一致并更清晰,表明利用该系统进行突变HBsAg的亚细胞定位分析优于传统的免疫荧光染色方法。　　 第五章总结了本论文得到的相关结果。　　 综上所述,本论文构建了一个HBsAg荧光蛋白示踪系统,可以有效地示踪HBsAg的细胞内定位,进一步该系统将可用于研究病毒侵入、细胞内组装及释放等过程。