目的：表达人高尔基体糖蛋白73(GP73)的融合蛋白，制备其相应抗体，并为制备相应的肝癌诊断试剂盒奠定基础。　　方法：利用生物信息学方法分析GP73的序列，根据它的亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段85个氨基酸序列的基因片段，提取转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞(293细胞)中的总RNA，应用RT-PCR、PCR技术扩增出此段GP73基因，将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接，转化DH5α感受态大肠杆菌，进行克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系，用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，最终在BL21大肠杆菌中表达OPT3融合蛋白(分别含有HIS和GST标签)，并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。纯化后与其他两种肝癌相关蛋白磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和热休克蛋白70(HSP70)混合作为抗原联合免疫Balb/c小鼠，用聚乙二醇(PEG)介导Balb/c小鼠脾细胞与SP/20骨髓瘤细胞融合。经选择性培养、纯化的GP73蛋白特异性筛选及有限稀释法克隆化，获得了8株能稳定分泌三种抗原相应抗体的杂交瘤细胞系。　　结果：从293细胞株提取的RNA经RT-PCR、PCR扩增后得到一条255 bp的DNA片段，经测序鉴一定为GP73基因片段；并在大肠杆菌中实现了高表达，His-GP73融合蛋白浓度为8.59 mg/mL，GST-GP73融合蛋白浓度为10.02 mg/mL。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定为GP73融合蛋白。用GP73融合蛋白及其他两种肝癌相关蛋白GPC3和HSP70三种蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠后进行细胞融合，选择性培养，获得了8株分泌三种抗体的杂交瘤细胞系。　　结论：采用原核表达方法获得了高纯度的GP73融合蛋白，用该融合蛋白与其他两种肝癌相关蛋白免疫Balb/c小鼠后，通过细胞融合技术能够获得分泌相应抗体的杂交瘤细胞系，为进一步开发肝癌诊断试剂盒打下了基础。