淫羊藿素抗肝癌血管生成的体外实验研究

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目的:  在体外水平研究淫羊藿素(Icaritin,ICT)对肝癌血管生成的抑制作用,并从调节人脐静脉内皮(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞株和人肝癌SMMC-7721细胞株血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与色素上皮衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)的比例,重塑血管生成调控平衡的角度部分揭示ICT的疗效机理,为ICT抗肝癌血管生成的临床应用奠定基础。  方法:  本课题分为两部分。第一部分,淫羊藿素的抗人肝癌细胞SMMC-7721作用及体外抗血管生成作用。实验分为空白对照组、二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)溶剂对照组、10-6mol/LICT组、10-7moL/LICT组、10-8mol/LICT组及沙利度胺(Thalidomide,TLD)阳性对照组,使用四氮唑盐还原法(MTT)检测ICT抗人肝癌细胞SMMC-7721细胞株增殖的作用;使用MTT法检测ICT对HUVEC增殖的影响;应用划痕实验(定性)观察ICT对HUVEC迁移能力的影响;应用transwell小室趋化实验(定量)观察ICT对HUVEC迁移能力的影响;应用Matrigel小管形成实验观察ICT对HUVEC小管形成能力的影响。第二部分,淫羊藿素抗肝癌血管生成的机制。实验分为空白对照组、10-6mol/LICT组、10-7mol/LICT组、10-8mol/LICT组及TLD阳性对照组,采用实时荧光定量PCR法检测ICT对HUVEC和SMMC-7721VEGFmRNA及PEDFmRNA表达水平的影响。  结果:  1、在SMMC-7721的MTT实验中,结果显示不同浓度的淫羊藿素组及TLD与空白组比较有统计学差异(P<0.01);DMSO溶剂对照组与空白组比较没有统计学差异(P>0.05):在HUVEC的MTT实验中,结果显示不同浓度的淫羊藿素组及DMSO溶剂对照组与空白组比较无统计学意义(P>0.05),TLD组与空白组比较有统计学意义(P<0.05)。  2、划痕实验(定性)结果显示,不同浓度ICT及TLD与空白组相比较对HUVEC的迁移具有抑制作用;DMSO溶剂对照组对HUVEC的迁移未见抑制作用。  3、transwell小室趋化实验(定量)结果显示不同浓度ICT组及TLD组与空白组比较有统计学差异(P<0.05或P<0.01);DMSO溶剂对照组与空白组比较没有统计学差异(P>0.05)。  4、Matrigel小管形成实验,结果显示不同浓度ICT组及TLD组与空白组比较有统计学差异(P<0.01);DMSO溶剂对照组与空白组比较没有统计学差异(P>0.05)。  5、实时荧光定量PCR检测结果表明,经ICT和TLD作用HUVEC和SMMC-7721后,10-7mol/L、10-8mol/LICT组和TLD组与空白组比较VEGFmRNA表达呈明显下降(P<0.05或P<0.01)趋势,而PEDFmRNA的表达呈明显上升(P<0.05或P<0.01)趋势。  结论:  体外实验研究发现,淫羊藿素对人肝癌细胞具有一定的抑制作用,同时淫羊藿素在体外对血管生成具有明显的抑制作用。其作用可能与抑制VEGFmRNA的表达和促进PEDFmRNA的表达有关。
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