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AAL是本课题小组从药用真菌杨树菇中分离纯化的一种真菌凝集素，我们发现AAL可诱导小鼠肝脏急性损伤的作用，本论文从生化指标ALT、AST，肝脏组织切片HE染色，肝脏免疫细胞比例的改变以及肝脏细胞因子的表达情况，对AAL诱发的肝损伤作用机理做初步探讨。 目的： 1.通过对AAL诱导后小鼠肝脏的变化，ALT、AST的表达，检测AAL是否诱导了小鼠的肝脏损伤； 2.分析小鼠肝脏免疫细胞比例的变化情况； 3.分析小鼠肝脏细胞因子的表达情况。 方法： 1.研究对象：C57BL/6小鼠，雌性，SPF级，6-8周龄，购于南方医科大学。动物合格证书由广东省实验动物研究所出具。在温度为22℃，湿度为55%，12 h白天/黑夜的SPF级条件的实验动物中心饲养，小鼠处理过程和实验流程均遵循实验动物管理规范条例。 2.动物模型：将2.5mg/kg的AAL尾静脉注射到C57BL/6小鼠体内，处理后0h，6h和9h三个时间点眼球采血，血清用于检测转氨酶ALT和AST的活性，同时处死小鼠，取肝脏用来做石蜡组织切片，HE染色，酶解肝脏后分离单个核细胞，用trizol裂解后研磨提肝脏总RNA。 3.血清ALT、AST的检测：用小鼠的血清ALT、AST检测试剂盒检测小鼠血清ALT、AST的含量。 4.小鼠肝脏组织石蜡切片及HE染色：将小鼠肝脏新鲜组织固定、包埋、切片、染色。 5.小鼠肝脏免疫细胞比例的分析：分离小鼠肝脏的单个核细胞，用Anti-Mouse-NK1.1-APC，Anti-Mouse-CD3e-FITC，Anti-Mouse-CD69-PE，Anti-Mouse-CD4-APC-eFluor，Anti-Mouse-CD8a-PerCP Cyanine5.5这5种抗体进行细胞表面抗原染色，并用流式细胞仪对其检测。 6.小鼠肝脏细胞因子的mRNA检测：提取小鼠肝脏的总RNA，经逆转录后，采用实时荧光定量PCR检测IL-10、IL-33、IL-27、IFN-γ和TNF-a这5种细胞因子的表达情况。 结果： 1. ALT和AST试剂盒检测结果显示：AAL诱导后6h组与0h相比，ALT的测定值升高了134倍，AST的测定值升高了23倍。9h组与0h相比，ALT的测定值升高了94倍，AST的测定值升高了19倍。 2．HE染色结果显示：6h和9 h组呈现明显的肝损伤，可见肝窦内红细胞淤积，肝实质细胞皱缩，连接消失，与周围的细胞脱离，大量肝细胞开始空洞化，坏死区还可见淋巴细胞、中性粒细胞等免疫细胞浸润。 3.流式细胞术检测结果显示：与0h组相比，AAL注射6h后，小鼠肝脏T细胞比例由27.92%显著升高到45.95%， NKT细胞的比例由2.46%显著升高到6.36%，CD8+T细胞的比例由17%显著升高到27.15%，而6h组Kupffer cells、NK细胞和CD8+T细胞的比例与0h比较没有显著变化。CD69+T细胞的比例由15.18%显著升高到24.01%，CD69+CD8+T细胞的比例由6.26%显著升高到14.67%。 4. Real time PCR检测结果显示：与0h组相比，AAL诱导6h后肝脏细胞因子mRNA表达分别升高25.14倍（IL-10），4.62倍（IL-33），5.14倍（IL-27），16.51倍（IFN-γ），28.10倍（TNF-α）。 结论： 1. AAL（2.5mg/kg）尾静脉可诱导C57BL/6小鼠出现急性肝脏损伤。 2. AAL诱导的急性肝脏损伤上调了NKT细胞和CD8+T细胞的比例，并且促进小鼠肝脏T细胞和CD8+T细胞的活化。 3. AAL诱导的急性肝脏损伤中细胞因子IL-10、IL-33、IL-27、IFN-γ和TNF-α出现显著性上调。