聚合酶链反应和限制性酶切分析用于甲真菌病诊断及病原分类的初步探讨

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甲真菌病已成为一种非常重要的真菌性皮肤病,到目前为止仍无一种可靠的、可重复的、快速的实验方法,能对甲真菌感染作出准确的判断.目的:用分子生物学方法提高甲真菌病诊断的敏感性和特异性,缩短实验室诊断病原菌的时间.方法:尝试用文献中报道的,针对18S-rRNA基因序列设计的4对真菌特异性通用引物,应用PCR方法对真菌菌株基因组进行扩增,PCR产物行限制性酶切分析.并将其中认为比较理想的TI1和TR2引物应用于22例甲标本(病甲18例,正常甲4例),检测甲真菌感染并鉴别病原菌,同时将其结果与传统的KOH直接镜检、真菌培养、组织病理学检查方法进行比较.结论:PCR方法诊断甲真菌感染的敏感性明显高于KOH直接镜检和真菌培养,与组织病理学检查相似并稍高.PCR结合HaeⅢ酶切分析对常见病原菌分类结果较好,与培养结果基本一致,但对于一些少见霉菌的分类仍不理想,尚需结合其它多对引物或限制性内切酶进行更详细的分类.
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