本文从以下两部分展开论述：　　第一部分 eNOS/F92A-Cav1基因对BMSCs细胞中NO含量及血管形成能力的影响　　目的：本课题采用内皮型一氧化氮合酶（eNOS）与突变的小窝蛋白（F92A-Cav1）基因共感染骨髓间充质干细胞（BMSC），研究eNOS/F92A-Cav1基因对BMSCs扩血管因子NO的产生及BMSCs的血管形成能力的影响，以期改善肺动脉高压（PAH）的血管功能。　　方法：本研究中采用Ficoll（1.077g/ml）密度梯度离心法从大鼠股骨及胫骨骨髓中提取并培养BMSCs，使用流式细胞仪技术对BMSCs进行表型鉴定；按Lipofectamin2000转染试剂说明将各目的基因及包装质粒共转染293T细胞并浓缩、纯化慢病毒颗粒；将指数生长期的BMSCs随机分为6组：空白对照组（仅BMSCs）、阴性对照组（感染空载体pLVX-mCMV-ZsGreen的慢病毒质粒）、Cav1组（感染LV-Cav1慢病毒颗粒），F92A-Cav1组（感染LV-F92A-Cav1慢病毒颗粒）、eNOS组（感染LV-eNOS的慢病毒颗粒）、及eNOS/F92A-Cav1组（共感染LV-eNOS和LV-F92A-Cav1慢病毒颗粒）；病毒感染5天后，westong-blot法观察各组eNOS及Cav1蛋白的表达；以griess法检测细胞上清液培养基中NO的含量；采用cck-8法观察生成的NO是否影响BMSCs细胞活性；血管形成实验观察各组BMSCs的血管形成能力。　　结果：浓缩纯化的慢病毒滴度为1×108TU/ml；倒置荧光显微镜下观察各组慢病毒感染BMSCs的效率达85％以上；weston-blot检测结果显示，eNOS及eNOS/F92A-Cav1组中eNOS蛋白表达明显增高，Cav1、F92A-Cav1及eNOS/F92A-Cav1组Cav1蛋白的表达增高；与对照组相比，NO的终末稳定产物Nitrite的含量以eNOS/F92A-Cav1组最高（p<0.01），同时发现作为氮自由基的NO的增高，并不影响各组BMSCs细胞的活性（p>0.05）；血管形成实验发现eNOS/F92A-Cav1组BMSCs的血管形成能力最强。　　结论：各组慢病毒颗粒可高效感染BMSCs，感染效率达85%以上；共感染LV-eNOS和LV-F92A-Cav1慢病毒的BMSCs组中的NO含量最高，血管形成能力也较强，但升高的NO对BMSCs细胞活性并无明显杀伤作用，该研究为未来基于基因转染的BMSCs细胞治疗肺动脉高压等相关疾病奠定基础。　　第二部分 体内实验研究eNOS/F92A-Cav1基因修饰的BMSCs降低大鼠肺动脉压力的机制　　目的：本研究旨在探索eNOS/F92A-Cav1修饰后的BMSCs降低大鼠肺动脉压力的具体分子机制，为未来基于基因修饰的BMSCs治疗PAH的研究奠定科学的理论基础。　　方法：首先，采用野百合碱建立Wistar大鼠肺动脉高压模型；其次，PAH建立两周后，生理记录仪检测并记录大鼠肺动脉压力曲线，计算平均肺动脉压（MPAP），对大鼠右心室（RV）和左心室（LV）及室间隔（S）进行称重，计算右心肥厚指数（RV/（LV+S）；以苏木精-伊红法（HE）染色玻片，测量肺小动脉中膜的厚度（MT）、血管外径（ED），计算出肺小动脉管腔面积（VA）、血管总面积（TAA）、MT/ED（MT%）及VA/TAA（VA%）的值；再次，根据体内试验结果，将实验动物随机分为5组：即正常对照组（正常大鼠）、PAH组（静脉注射生理盐水治疗）、阴性对照组（注射空载体感染的BMSCs治疗）、eNOS组（注射LV-eNOS感染的BMSCs治疗），eNOS/F92A-Cav1组（注射LV-eNOS和LV-F92A-Cav1共感染的BMSCs治疗），实验动物建模2W后，以尾静脉注射法，将2×106/ml感染各组慢病毒的BMSCs细胞移植入相应实验动物组体内，2w时间为一疗程，治疗2个疗程，2个疗程后观察大鼠存活等一般情况；最后，于治疗4周后生理记录仪检测并记录大鼠肺动脉压力曲线，计算平均肺动脉压（MPAP），对大鼠右心室（RV）和左心室（LV）及室间隔（S）的进行称重，计算右心肥厚指数（RV/（LV+S）；以苏木精-伊红法（HE）染色玻片，测量肺小动脉中膜的厚度（MT）、血管外径（ED），计算出肺小动脉管腔面积（VA）、血管总面积（TAA）、MT/ED（MT%）及VA/TAA（VA%）的值；以griess法检测细胞上清液中NO的含量；以PCR法观察各组大鼠肺组织eNOS、PGIS、ET、KLF4mRNA的表达水平；western-blot法观察eNOS蛋白的表达情况。　　结果：与PAH大鼠模型组相比，给予负载eNOS/F92A-Cav1的BMSCs细胞可有效降低 PAH大鼠肺动脉压力（p<0.01）；抑制肺小血管平滑肌细胞的增生；降低右心肥厚指数RV/（LV+S）（p<0.01）和肺动脉中膜厚度指数（MT%）（p<0.01），血管管腔面积指数（VA%）（p<0.01）增高；血清中亚硝酸盐含量检测发现eNOS/F92A-Cav1组最高（p<0.01）；Realtime-PCR及western-blot研究结果发现，移植BMSCs细胞的各组大鼠肺组织中eNOS蛋白及mRNA的表达水平增高，缩血管因子ET1 mRNA的表达水平（p<0.01）均降低，而扩血管因子PGIS mRNA的表达水平（p<0.01）升高，同时转录因子KLF4 mRNA的表达水平增高，其中以eNOS/F92A-Cav1组表现最为明显（p<0.01，p<0.01）。　　结论：本课题成功构建PAH的动物模型，获得科学的体内试验研究体系；研究证明负载eNOS/F92A-Cav1的BMSCs细胞可有效降低PAH大鼠肺动脉压力、右心肥厚指数及肺动脉中膜厚度指数，增加管腔面积指数，抑制血管平滑肌细胞的增生；促进血清中NO含量的增多；此外，还可促进肺组织中eNOS蛋白及mRNA的表达水平，降低肺组织中ET1 mRNA的表达水平、增加扩血管因子PGI2及转录因子KLF4的mRNA表达水平。