目的:研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制及凋亡诱导作用，分析甘草次酸对survivin、P38基因及蛋白的影响，进一步探讨其可能的抗癌机制。　　 方法:　　 一、细胞培养　　 细胞应用1640培养基培养于37℃，5％CO2的恒温培养箱中。细胞隔日换液传代1次，取处于对数生长期且台盼蓝拒染法测定活性在90％以上的细胞进行实验。　　 二、MTT细胞毒实验检测药物对细胞抑制作用　　 将GA用PBS稀释成15mmol/L母液分装待用。取K562细胞计数，对照组加入不含药液的培养基100ul，空白组加入PBS溶液100ul，实验组加入100ul用1640培养液稀释的12.5、50、75、100、125、150umol/L甘草次酸工作液。分别培养12h，24h，48h，72h后按试剂盒说明进行操作，酶标仪上测量波长570nm处各孔OD值。计算细胞抑制率，实验重复5次。细胞增殖抑制率=（实验组-空白组）/（对照组-空白组）×100％。　　 三、Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变　　 将细胞用50umol/L及100umol/L甘草次酸工作液培养24小时，同时设立阴性对照。Hoechst33258染色在激光共聚焦显微镜下观察细胞核形态变化。照相保存。实验重复3次。　　 四、流式细胞仪分析检测细胞周期　　 计数105数量级细胞，分别用100umol/L甘草次酸工作液培养12h、24h和48h。同时设立对照组。PI单染后上机检测。调整流式细胞仪变异系数在3％一下，用cell modifit软件分析细胞周期。实验重复3次。　　 五、流式细胞分析仪检测细胞凋亡　　 计数106数量级细胞0.5ml，分别用150umol/L甘草次酸工作液1ml，培养0、12、24、48h。同时设立对照组，进行Annexin V-PI双染后上流式细胞仪检测。　　 六、Western blot测survivin及P38蛋白　　 收集对照组和药物作用组（甘草次酸150μmol/L作用24h细胞），Western blot方法检测甘草次酸对K562细胞survivin及P38蛋白表达的影响。用凝胶成像系统分析软件Quantity one测灰度值，进行结果分析。　　 七、RT-PCR检测survivin及P38mRNA的表达　　 收集对照组和药物作用组（甘草次酸150μmol/L作用24h)细胞，提取细胞总RNA，反转录得到对应的cDNA。应用Real Time PCR扩增仪进行扩增反应，记录循环阈值（Ct值），计算survivin及P38基因的相对表达量。　　 结果:　　 一、甘草次酸对K562细胞增殖的影响　　 甘草次酸对K562细胞有显著的增殖抑制作用，呈剂量和时间依赖关系。　　 二、甘草次酸对K562细胞凋亡的形态学变化　　 甘草次酸对K562细胞有促凋亡作用。50umol/L，100umol/L甘草次酸工作液培养24小时的细胞及未经甘草次酸作用的对照组细胞应用Hoechst33258染色后在激光共聚焦显微镜下显示：细胞核呈现不同程度的晚期凋亡特征，表现为染色质浓缩，体积变小，变形，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。随着药物浓度的增加，凋亡特征表现显著。　　 三、甘草次酸对K562细胞周期的影响　　 甘草次酸作用于细胞12、24、48小时后，细胞周期发生改变。随着药物作用时间延长，主要表现为G1期细胞阻滞，G1期细胞数增多，G2期减少，S期变化不明显，GA各剂量组之间存在统计学差异。　　 四、流式细胞仪检测甘草次酸对K562细胞凋亡的变化　　 与空白对照组相比，不同剂量GA诱导K562细胞后在细胞存活数，细胞坏死数上均无显著差别。凋亡细胞数各组比较P小于0.05，具有统计学差异显著性。　　 五、GA能上调K562细胞中P38蛋白的表达降低survivin蛋白的表达　　 与空白对照组相比，GA组P38积分光度值有较明显的上升，差异均具有统计学意义;GA能降低K562细胞中survivin蛋白的表达；与空白对照组相比，GA组survivin积分光度值有较明显的下降，差异均具有统计学意义。　　 六、GA对K562细胞survivin基因及P38基因mRNA表达的影响　　 实时定量RT-PCR结果显示，survivin基因mRNA与对照组比值为0.352，加入GA组survivin基因mRNA水平明显下降；P38基因mRNA与对照组比值为1.825，加入GA组P38基因mRNA水平明显上升。　　 结论:甘草次酸能抑制K562细胞增殖，并诱导K562细胞凋亡，具有时间和剂量依赖关系。其机制可能与抑制survivin基因、激活P38基因有关，有望成为新型抗肿瘤药物。