miRNA-210在肾透明细胞癌中表达的研究

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目的1)探索肾透明细胞癌中是否存在差异表达的miRNA表达谱。2)探索miR-210在细胞活力,细胞凋亡,细胞周期,迁移和侵袭中的作用。3)探索miR-210下调后对HIF1α蛋白的表达有何影响。方法1)对9例配对的肾透明细胞癌(ccRCC)及其癌旁正常肾组织,采用TaqMan探针的低密度阵列芯片技术,对其相关特异性microRNAs进行分析,并对miR-210进行进一步的定量RT-PCR验证。2)使用miR-210抑制剂在CAKI-2和ACHN细胞株中下调miR-210,并设立阴性对照组,以评估miR-210在细胞活力,细胞凋亡,细胞周期,迁移和侵袭中的作用。3)进行western blot实验,检测miR-210下调后HIF1α蛋白表达的变化。结果1)用TaqMan探针的低密度阵列对9例ccRCC配对标本进行分析发现:78个miRNAs在肾癌及相应癌旁组织中差异表达,且大多数miRNAs表现出下降的趋势,其中73个在肾癌中表达下降,仅5个表达上调。进一步对35例肾癌组织及10例正常肾实质进行定量RT-PCR验证miR-210在肾癌中高表达。2)ACHN及CAKI-2肾细胞系转染miR-210抑制剂后,与对照组比较,miR-210表达水平明显下降;细胞活力下降;细胞凋亡率无明显差异;在CAKI-2细胞系中,大量细胞停留在S期,G2期减少,在ACHN细胞系中,细胞周期未见明显改变;在ACHN肾细胞系转染miR-210抑制剂后,细胞迁移及侵袭潜能减弱。3)下调miR-210后,HIF1α蛋白表达水平明显下降。结论1)ccRCC与正常肾组织中存在差异miRNAs表达谱,可能与肾透明细胞癌的发生有关。2)miR-210在肾透明细胞癌中高表达,提示miR-210可能促进肾透明细胞癌的发生。3)miR-210在细胞活力,细胞周期,细胞迁移和侵袭,以及在HIF1α蛋白表达水平中具有重要调节作用,进一步验证miR-210可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关。4)miR-210有可能成为肾透明细胞癌诊断及预后的生物标记物,且作为基因治疗的新靶点。
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