论文部分内容阅读
GPV（Goose Parvovirus）依据其形态、生化及培养特性被划归为细小病毒科细小病毒属成员，引起雏鹅和雏番鸭高度致死性疾病，主要以消化道，尤其是小肠部位的典型病变为特征。许多国家都爆发过该病，所有分离的GPV抗原性相似。目前主要依据临床症状结合血清学、病毒学方法诊断该病，这些方法大多费时、费力，容易延误该病的治疗，需建立一种快速、简便、特异的诊断方法。该病的防制依赖疫苗和抗血清及卵黄抗体的使用。目前使用的疫苗分为种鹅用和雏鹅用的鹅胚和鸭胚化疫苗，这些疫苗在实际生产中发挥巨大作用，因其为全毒苗或弱毒苗，存在着潜伏感染，排毒散毒，毒力返祖的缺陷，基因工程疫苗的研制可解决上述问题。 GPV的三种结构蛋白VP1、VP2、VP3位于同一开放阅读框内，共用同一终止密码子，VP1包含了组成VP2、VP3的所有氨基酸，因其具有这一特殊性，成为本研究的目的基因。本试验参照Genbank中发表的GPV B株基因序列设计并合成了扩增GPV H1株VP1的一对引物，利用PCR技术扩增出长约2.2Kb的目的片段，经酶切鉴定后，将其插入原核表达载体pPRoEXHTb的XbaⅠ、XhoⅠ多克隆位点间，构建了GPVH1株VP1的原核表达载体GP1-pPRO。测序结果表明GPVVP1基因由2199个核苷酸组成，编码732个氨基酸。与B株、YG株进行了同源性比较，核苷酸同源性分别为98.5％，93.18％；氨基酸同源性分别为98.09％，95.77％。同时将该目的基因插入到杆状病毒表达系统的供体质粒pFASTBACHTb的XbaⅠ、XhoⅠ多克隆位点间，经酶切、PCR鉴定后，将重组的供体质粒GP1-FAST转化到含有杆状病毒和辅助质粒的DH10BAC感受态细胞中，获得了表达GPV H1株VP1的重组杆状病毒GP1-BAC。 用Antheprot5.0对GPVH1株VP1、VP2、VP3及B、YG株VP1的二级结构、抗原性进行预测及比较，表明GPVH1株VP1、VP2、VP3共同部分的二级结构、抗原性无差别：GPVH1、B、YG株VP1的二级结构、抗原性存在差别。GPVH1株与其他细小病毒VP1的氨基酸序列同源性比较证明GPVH1与依赖病毒AAV-2的同源性高于与自主细小病毒的同源性。 本试验为进一步研究GPV的分子生物学特性，VP1的理化特性、生物学活性奠定了基础：为GPV的诊断试剂、基因工程疫苗的研制做了前期工作：同时为GPV的分类地位及其进化关系提供了佐证。