环导恒温扩增技术(RT-LAMP)为近年来发明并流行的最新病原检测方法，其特点是快速、准确、仪器要求较低以及检测结果进行可视化处理后，能变为肉眼可见的结果。本研究针对新城疫病毒F基因的保守区域自行设计了两对应用于RT-LAMP的特异性引物。经过一系列的实验，摸索出本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应体系，并检测出本RT-LAMP方法对新城疫病毒RNA的最低检测阈值为100pg。 通过酶切鉴定对RT-LAMP方法进行其特异性的鉴定。实验结果显示，选用的特异性酶能有效的对RT-LAMP产物进行切割，证明了本方法具有良好的特异性，能有效的鉴别新城疫病毒。 通过人工发病试验将RT-LAMP方法与传统的鸡胚分离方法进行比较，验证了该方法的准确性。结果表明，RT-LAMP检测结果与传统的鸡胚分离检测结果比较，组织病料检测结果的阳性符合率达83.9％以上，棉拭子的检测结果的阳性符合率达82.6％以上；并且，RT-LAMP方法对新城疫人工发病的最早检测时间为感染后的第3天；最佳检测部位为气管和肺。 多重RT-PCR方法是目前实验室常用的分子生物学诊断方法，本实验根据新城疫病毒F基因裂解位点处的特异性序列，设计了一对鉴别新城疫病毒毒力强弱的PCR引物。同时根据鹅源新城疫病毒NP基因与P基因之间的一段特征性序列，设计了一对鉴别鹅源新城疫病毒的引物，该引物能鉴别该病毒是否来源于鹅。 通过实验，优化了多重RT-PCR的最佳反应体系，其中同样浓度的各引物最佳混合比例为1:1，实验表明本实验建立的多重RT-PCR方法对新城疫病毒cDNA的最低检测阈值为10pg。 人工发病实验表明了本文建立的多重RT-PCR具有良好的准确性，与传统的鸡胚分离方法相比，检测准确率符合性分别达到91.1％和92.3％，对棉拭子检测的符合率亦达87.7％和86.9％，表明了该方法具有良好的特异性和敏感性。 对7株新城疫病毒进行多重RT-PCR检测，结果显示7株病毒中6株为强毒株，1株为弱毒株，7株病毒中4株为鹅源。对比7株毒株的致病性指数及分离来说资料，表明本研究所建立的多重RT-PCR检测方法对新城疫病毒毒力的鉴定及来源具有较高的准确性。 将多重RT-PCR扩增所得7株新城疫病毒强弱毒扩增产物及4株鹅源新城疫病毒的特异性扩增产物进行回收，克隆并测序。结果显示，本研究所用的7株新城病毒中，除NH-04株外其余均为强毒力毒株。4株鹅源新城疫病毒的PCR扩增到同源性分析显示本研究所用的4株鹅源新城疫毒株与国内鹅源毒株SF02具有较高的同源性，与La Sota等毒株的同源性较低。即本研究设计的新城疫病毒强弱毒鉴别引物及鹅源新城疫病毒鉴别引物均具有很好的特异性。 结合本研究所建立的RT-LAMP和多重RT-PCR方法，在生产实际中可以利用RT-LAMP进行疫病的初步诊断，然后将检测出的阳性样品进行多重RT-PCR作出检测，就能在较短的时间内获得新城疫疫情比较准确的诊断结果。两种方法结合使用能大大提高在生产中对疾病的诊断、监控和防治效率，具有广阔的应用前景。