心肺脑复苏(cardiopulmonary cerebral resuscitation,CPCR)-直是急诊医学研究的重要内容。心肺复苏的目的在于脑复苏,脑复苏成功与否决定整个抢救的成败。因此目前心肺脑复苏的研究比较集中在以脑复苏为重点的后期复苏和高级生命支持。心脏骤停后脑功能障碍的主要病理生理过程是大脑缺血再灌注损伤,其中涉及兴奋性氨基酸的神经毒性,钙离子稳态失调,神经元凋亡等机制。既往研究证明阿片受体系统与缺血再灌注有着密切的关系。激动阿片受体可模拟缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)减轻缺血再灌注损伤。阿片受体主要有三种亚型：μ,δ,κ。目前认为主要是δ阿片受体参与了IPC过程。DADLE是美国SIGMA公司人工合成的一种δ阿片受体激动剂,可以同时激动δ1和δ2受体。因能模拟IPC对心肌的保护作用,DADLE已作为研究IPC的一种“工具”药。研究发现δ阿片受体激动剂有着与冬眠诱导触发物(hibernation induction trigger,HIT)相似的器官保护作用,使得DADLE成为近年来研究的热点,尤其是在神经保护的领域中。在体外培养神经元的离体实验中发现,缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)可以减轻缺氧时谷氨酸导致的神经元损伤,而δ阿片受体拮抗剂能完全阻断HPC的这种神经保护作用。在缺氧前用DADLE处理神经元细胞可以减少缺氧损伤,提高神经元存活率。然而,关于DADLE神经保护的在体实验研究还鲜有报道,另外,在既往的实验中,DADLE的干预主要是缺血前的预处理,DADLE是否在神经元缺血后仍发挥神经保护作用,目前还不清楚。 本研究利用大鼠全脑缺血再灌注模型模拟心脏骤停而造成全脑缺血及心肺复苏后的全脑缺血再灌注状态,分别在缺血前,缺血后以及再灌注早期给予DADLE干预,观察比较其病理形态学改变及中枢损伤性生化标记物血清S-100B蛋白水平的变化,探讨DADLE预处理和后处理是否对全脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用。研究目的本实验采用在体实验的方法,建立大鼠全脑缺血再灌注的动物模型,研究δ阿片受体激动剂DADLE预处理和后处理对全脑缺血再灌注损伤的影响,为脑复苏治疗提供一条新思路。 方法： 将50只健康SD大鼠随机分为5组即：假手术组,模型组,DADLE预处理组,DADLE缺血后处理组,DADLE再灌注期处理组。应用二血管阻断加低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。假手术组(N组)不予缺血,不给药,仅予手术操作。模型组(I/R组)按上述方法制模,缺血15分钟,再灌注120分钟。DADLE预处理组(D1组)在缺血前10分钟静脉注射DADLE(3 mg·kg-1)。DADLE缺血后处理组(D2组)在缺血期结束后立即静脉注射DADLE(3 mg·kg-1)。DADLE再灌注期处理组(D3组)在再灌注早期(再灌注15分钟时)静脉注射DADLE(3mg·kg-1)。实验结束后经心脏取血2ml,3000r·分钟-1离心5分钟,取上清液1ml,置-80℃冰箱保存,待测S-100B蛋白。实验结束,处死大鼠,取大脑组织,以10％福尔马林固定。-80℃冻存的血清标本在室温下自然解冻后,用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测定血清S-100B蛋白水平。留取的大脑组织常规制作石蜡切片,苏木素-伊红(H.E.)染色,光镜观察顶叶皮层和海马区的形态学变化。部分大鼠右侧海马标本1mm,3％戊二醛固定,电镜观察海马超微结构变化。 结果： 与假手术组相比,模型组与DADLE各处理组血清S-100B蛋白水平显著升高(P<0.05)。模型组的血清S-100B蛋白水平又高于DADLE各处理组的血清S-100B蛋白水平(P<0.01)。DADLE预处理组,DADLE缺血后处理组,DADLE再灌注期处理组三组之间的血清S-100B蛋白水平差异没有统计学意义(P>0.05)。大脑组织形态学观察显示,DADLE各处理组的病理损伤均轻于模型组；DADLE预处理组,DADLE缺血后处理组,DADLE再灌注期处理组三组之间的病理变化差别不大。 结论： 1.δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤有保护作用。 2.无论是预处理还是后处理,DADLE均能减轻全脑缺血再灌注损伤。模拟缺血预处理可能并非是DADLE对神经元缺血再灌注损伤保护作用的唯一机制。