核酸疫苗做为第三代疫苗不仅能够诱导强的体液免疫同时可以诱导较好的细胞免疫相对于传统疫苗有显著优势,为乙型肝炎、囊虫病等一系列感染性疾病的防治开辟了新的领域。然而在大量临床实验中发现核算疫苗在大动物的免疫效果不佳及核酸疫苗的安全问题使得核酸疫苗的发展受到很大的制约。如何提高核酸疫苗的免疫原性、阐述核酸疫苗的免疫机制成为核酸疫苗发展的核心问题。 近年来随着对核酸疫苗研究的深入,新的免疫剂型、免疫方案正在为核酸疫苗的发展带来新的动力,本课题通过一种新的免疫方案,微针注射辅以细胞因子Flt3L的策略来提高乙肝DNA疫苗的免疫效果。微针是在电子微电机的技术上发展的新技术,将硅、化学聚合物等经过氢氧话钾腐蚀技术焊接到1平方厘米的芯片生产出来的聚合针列,其高度在50微米到200微米能够有效穿透皮肤表层和角质层到达活性表皮层,而皮肤尤其是活性表皮富含抗原提呈细胞,一直被认为是高免疫活性部位,核酸疫苗的靶向给药与表皮层,可以直接作用与抗原提呈细胞从而提高免疫效果。Flt3L一种免疫刺激分子,能够增强T细胞依赖性和T细胞非依赖性2种途径的T细胞的增殖。此外Flt3L还能够诱导重要的抗原提呈细胞DC的分泌和活化。从不同免疫组合中我们比较得到微针联合Flt3L能够明显的增强疫苗的体液免疫和细胞免疫水平。本课题系统地考察了这种新的免疫方案的免疫效果,并探讨了其增效的分子机制。结果表明微针联合Flt3L注射能够显著增强DNA疫苗的免疫原性,增强疫苗免疫效果。 核酸疫苗诱导免疫效果得到大量的验证,但是其安全性和其保护机制一直是核酸疫苗的核心问题未被阐明。以pVAX1、pCDNA3质粒为载体构建了表达AnnexinB1抗原的DNA疫苗,用pVAX-B1、pCDNA3-B1和B1蛋白苗以C57BL/6小鼠为实验动物实施了免疫。在检测了小鼠的总抗体滴度、T细胞增殖的能力、CTL活性的基础上,进一步进行了比较脾脏蛋白质组学的研究,以期能阐明疫苗安全性、免疫增效作用的机制。通过不同载体核酸疫苗的胶比较,我们发现pCDNA3-B1组小鼠有2个蛋白上调、3个蛋白下调；其中growth factor receptor bound protein 2的生理功能都和免疫保护有一定的关系,而proxiredoxin 1和proxiredoxin 6的生理功能都和疫苗安全密切相关。这3个蛋白可以作为潜在的免疫的新型分子标记物去分析疫苗诱导免疫保护的机制及可能引发的不安全问题。