在木质素降解过氧化物酶系中，多功能木质素降解过氧化物酶(VP)正引起人们极大的研究兴趣，主要原因：(ⅰ)VP具有不同的活性位点氧化不同的底物(Mn2+、木质素等)；(ⅱ)能直接氧化一些LiP、MnP、CIP等不能直接氧化的化合物。　　 将密码子优化的杏鲍菇多功能过氧化物酶基因vpl2克隆到载体pET-32a(+)上，并在E coli BL21(DE3)中过表达。在IPTG诱导和血红素存在的条件下，带有N-His6-Trx-tag的VP被成功表达。纯化后的融合蛋白能氧化ABTS，Mn2+，VA，RB5等底物，但是酶活受到tag影响。本课题是第一次利用IPTG诱导方法在E.coli表达有活性的多功能木质素降解过氧化物酶。　　 多功能过氧化物酶属于血红素蛋白，这类蛋白利用H2O2作为电子受体来催化反应。但是底物H2O2极易通过一个自杀失活过程使过氧化物酶失活，因此需要通过蛋白工程的手段来提高酶的H2O2稳定性。　　 通过序列比对和晶体结构(PDB ID：2BOQ)分析，鉴别了可能影响VP H2O2稳定性的氨基酸，血红素附近易被氧化的氨基酸：Met152，Met247，Met262，Met265；H2O2结合区附近的氨基酸：Ala77，Ala79，Ile81；血红素结合袋附近的氨基酸：Arg43，Phe46，Pro141，Ser168，Phe186。利用定点突变方法成功构建了17个突变体，包括14个单位点突变体M152F、M247L、M262L、M265L、A77S、A79S、181L、A77E、P141A、R43L、S168A、F186A、A79L、F46G，1个双位点突变体M247L/M265L，2个三位点突变体A77E/181L/A79S和A77S/I81L/A79L。　　 对突变体进行动力学研究。一些突变体的活性大幅降低，如F46G(完全失活)，F186A，R43L等，表明这些氨基酸对VP的活性非常重要；一些突变体对动力学参数的影响不大，如M262L，A77S等。有趣的是一些突变体提高了VP盼催化效率，如M265L，A77E，I81L，M247L/M265L，A77E/A79S/81L等，特别是S168A，对底物ABTS催化效率提高了8.6倍。Ser168的羟基和组成远程电子转移途径的Leu165的酰胺氧形成非常强的氢键(2.9 A)。S168A突变导致和Leu165之间的强氢键作用不再存在，影响了和血红素、Leu165之间的作用，因此影响了远程电子转移，甚至ABTS结合区和Mn2+结合区。　　 对突变体进行了H2O2稳定性研究。一些突变体对H2O2的稳定性没有太大影响，如A77S，A79L，M152F，M262L等；而一些突变体显著提高了H2O2稳定性，如M247L，M265L，S168A，M247L/M265L，A77E/A79S/181L等，表明易被氧化的氨基酸，血红素附近的氨基酸，参与远程电子传递过程的氨基酸，H2O2结合袋附近的氨基酸都对VP的H2O2稳定性有影响。　　 在17个突变体中，突变体M265L，S168A，以及A77E/A79S/181L特别有意义，因为它们的催化效率和H2O2都得到提高，尤其S168A。这些结果为进一步提高VP的H2O2稳定性奠定了基础。