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随着缺钙人群的日益增加,钙制剂逐渐普及人们的生活,而钙制剂在人体内的吸收率成为人们选择钙制剂的新标准。以畜禽骨为原料制备的钙制剂,由于与人骨成分相接近,在人体中的吸收率最高。本文选用猪板骨为原料制备骨蛋白多肽螯合钙。
通过单因素实验确定猪板骨预处理的工艺条件,从而制备猪骨粉和骨蛋白。猪板骨预处理的最佳工艺为:剔除猪板骨上残留的猪肉以及肌腱等杂物→→→用10倍体积的7%碳酸氢钠溶液浸泡猪板骨1 h→→→用10倍体积的9%氯化钠溶液浸泡猪板骨9 h→→→用5倍体积的75%的乙醇浸泡猪板骨12 h→→→用5倍体积的正丁醇浸泡猪板骨12 h→→→高压蒸煮3 h,将所得的溶液过滤,得到的固体去除骨髓即为骨粉,而所得的滤液去除骨油,浓缩,冷冻干燥即得骨蛋白。
以制备的骨粉为原料,采用碱性蛋白酶酶解,通过单因素及响应面实验确定蛋白酶酶解猪骨粉的最佳工艺条件:酶添加量185.52 U/mg,酶解温度为62.89℃,pH值为8.86,此时猪骨粉的水解度为20.19%。以猪骨粉酶解液为原料配制发酵培养基,利用保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌进行混菌发酵。通过单因素和正交试验确定发酵的最佳工艺条件:杆菌/球菌=2:1,蔗糖添加量7%,温度35℃,转速120 rpm,菌种接入量12%,发酵时间18 h,此时发酵液中游离钙含量为486.32(mg Ca2+)/(g骨粉)。
通过单因素和响应面实验确定胰蛋白酶酶解骨蛋白的最佳工艺条件:pH值为6.91,酶解温度为60℃,酶添加量200 mg/(g骨蛋白),料液比615 mL/g,水解时间4 h,此时水解度为29.36%。将蛋白多肽溶液与骨钙溶液混合,通过单因素及响应面实验,以螯合率为指标,确定制备多肽螯合钙的最佳工艺条件:pH值7.89;温度39.94℃;浓缩液与胶原多肽溶液体积比为7/1,螯合30 min,无水乙醇添加倍数为11倍,此工艺条件下,螯合率为79.84%。