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研究目的1.探讨内源性CD4+CD25+调节性T细胞删除后对蛛网膜下腔出血后小鼠神经功能的影响。2.探讨内源性调节性T细胞删除对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的影响。3.通过酶联免疫吸附法测定皮层IL-6、 TNF-α,初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞删除对脑组织炎症的影响。4.通过免疫荧光法检测皮层区炎症因子IL-6、GFAP的含量，通过westernblot检测脑组织中IL-6的含量，进一步探讨内源性CD4+CD25+调节性T细胞删除对蛛网膜下腔出血后脑组织炎症的影响。研究方法将雄性昆明小鼠（25-30g），随机分入假手术组、SAH组、Tregs删除组以及PBS注射组中。用血管内穿刺法建立小鼠蛛网膜下腔出血模型，激光多普勒血流仪记录顶叶皮层脑组织血流量的变化。假手术组不穿破血管。Tregs删除组模型需经过小鼠腹腔注射0.20mgCD25+特异性抗体（PC61mAb），来构建Treg细胞缺失小鼠。PBS腹腔注射组，经腹腔注射0.20mg的磷酸盐缓冲液。术后处死小鼠后,快速取脑,并用照相机拍摄脑基底池部出血情况,根据Sugawara等的报道,进行出血量评分,判定出血等级。采用Garcia评分系统对运动感觉进行评分,总分为18分。于蛛网膜下腔出血后72h，用干湿重比较法检测脑组织含水率。用伊文思蓝法评价各组动物血脑屏障通透性。于术后72h，取脑制成石蜡切片，行苏木素-伊红染色，于镜下观察各组小鼠基底动脉管径大小以及管壁厚度的变化。制作脑切片后尼氏染色观察神经细胞变化。用TUNEL染色观察脑部细胞凋亡。用免疫荧光法测定皮层IL6、GFAP的表达及分布情况。用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-6、TNF-α含量。用western blot检测皮层组织炎症因子IL-6的含量。研究结果1.出血程度：假手术组无出血，假手术组无出血；蛛网膜下腔出血组、PBS注射组、Tregs删除组在蛛网膜下腔均见到血液，各组之间出血量无统计意义的差异。2.神经功能评分：假手术组评分为18分， SAH组、 PBS注射组与假手术组评分相比，有统计学意义(P<0.05)，Tregs删除组与PBS注射组评分相比，有统计学意义(P<0.05)，与SAH组的评分相比也有统计学意义(P<0.05)。3.血脑屏障通透性及脑水肿测定：小鼠SAH后血脑屏障通透性增加，脑组织含水量加重；Tregs删除组与SAH组相比，血脑屏障通透性显著增加(P<0．05)，脑组织含水量显著加重(P<0.05)。4.基底动脉形态：小鼠蛛网膜下腔出血后基底动脉明显痉挛，Tregs删除后痉挛更为显著(P<0.05)。5.尼氏染色：蛛网膜下腔出血后，小鼠皮层中尼氏小体的神经元数量明显减少，Tregs删除后减少更为显著(P<0.05)。6.细胞凋亡检测：蛛网膜下腔出血后，小鼠皮层区凋亡细胞数增多，Tregs删除后与SAH后相比,有显著统计学以及意义（P<0.05)7.免疫荧光法测定皮层区IL-6、 GFAP SAH组、 PBS注射组、 Treg细胞删除组皮层区表达量均增多，Tregs删除组增多更为显著(P<0．05)。8.ELISA测定脑组织中IL-6和TNF-α含量： SAH后小鼠脑组织中IL-6和TNF-α表达量均有所升高， Tregs删除组与之相比更显著(P<0.05)9.Western blot检测皮层区IL-6： SAH组、 PBS组、 Tregs删除组的脑组织中IL-6表达量均增多，Tregs删除组与SAH组、假手术组相比有显著统计学意义(P<0.05)。研究结论1.本研究成功构建了蛛网膜下腔出血小鼠模型以及Tregs删除小鼠模型，并发现Tregs删除后会加重脑血管痉挛、脑组织水肿、血脑屏障通透性、凋亡等，同时也加重脑组织的炎性损伤。2.小鼠SAH后产生神经功能有所损害，Tregs删除后可加重小鼠运动、感觉功能的损伤。