论文部分内容阅读
目的：脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（Adipocyte Fatty Acid-binding Protein,FABP4）不仅与长链脂肪酸的摄取、运输有关，同时大量研究表明FABP4还参与细胞内能量代谢，与胰岛素抵抗密切相关。本实验拟探讨mir-142-3p对3T3L1细胞分化过程的影响及其对FABP4表达的影响。 方法：(1)实验运用TargetScan、MicroCosm、DIANA TOOLS和microRNA.org四个在线靶基因预测软件，以FABP4基因序列为模板，预测可以与FABP4mRNA3’端非编码区特异性结合的miRNA，选择四种软件均预测到的mir-142-3p为研究目标。(2)3T3L1细胞经鸡尾酒法（IBMX、地塞米松、胰岛素）诱导分化为成熟脂肪细胞，荧光定量PCR法检测成熟脂肪细胞内mir-142-3p的变化。(3)构建mir-142-3p质粒并扩增，用高表达质粒转染3T3L1细胞，使细胞内mir-142-3p表达一过性增高，然后再诱导分化，通过油红O染色观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化的影响。(4)荧光定量PCR观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化过程中细胞内FABP4、PTEN mRNA的影响。(5)Western Blot法观察mir-142-3p对3T3L1细胞分化过程中细胞内FABP4、PTEN、AKT、ERK蛋白水平的影响。 结果：(1)3T3L1细胞分化后，细胞内mir-142-3p明显减少（P<0.05），提示mir-142-3p可能参与了脂肪细胞分化的调控。(2)转染mir-142-3p高表达质粒后，细胞内FABP4mRNA表达升高，但在细胞分化过程中，FABP4mRNA的表达明显被抑制（P<0.05），远低于正常3T3L1细胞分化后细胞内FABP4mRNA的增加水平。Western blot实验证实细胞内FABP4蛋白水平也有相同的变化。(3)3T3L1细胞分化过程中PTEN蛋白含量明显高于转染前，但mir-142-3p对PTEN mRNA表达无明显影响（P>0.05）。(4)细胞内ERK蛋白与FABP4蛋白有相同的变化趋势，但AKT蛋白水平无明显变化。(5)Mir-142-3p高表达的3T3L1细胞分化速度明显减慢，细胞内脂滴积累速度减缓，且罕见大脂滴。 结论：(1)Mir-142-3p高表达可以减少3T3L1细胞分化过程中细胞内FABP4的表达，抑制3T3L1细胞向成熟脂肪细胞分化。(2)FABP4减少可能同时影响细胞内两条胰岛素信号转导通路，参与胰岛素抵抗。