针对频繁出现的弱毒疫苗免疫失败现象，本研究通过对河南省猪瘟流行病学调查和对流行株的分析，试图从病毒分子水平，比较流行毒株与疫苗株的分子差异，并企图研制出针对CSF的高效安全的E2 DNA疫苗，为彻底消灭猪瘟提供科学依据和技术支撑。主要试验和结果如下： 1．猪瘟流行病学调查。从2005年1月至2006年12月，在河南省9个地市的不同猪场收集疑似猪瘟病例379份，通过兔体交互试验、抗原检测试剂盒方法确定猪瘟病例181份，猪瘟阳性率占发病猪平均为47.76％。调查结果显示，不同地区不同猪场，猪瘟占发病猪的比例不同，以洛阳(83.87％)驻马店(67.86％)占发病猪的比例较高，其次是许昌(59.38％)和新乡(58.33％)。两种检测方法的结果基本一致，说明猪瘟在猪病中所占比例是最高的，是危害养猪业发展的主要疾病。对随病料收集到的河南省CSF流行病学原始资料进行整理、归纳和总结。文章讨论了猪瘟发生的原因，并提出了防治建议。 2．E2基因的克隆与分析比较。采用RT-PCR和nPCR扩增出4株河南近期(2005-2006年)猪瘟流行野毒的E2基因，将其分别克隆于pGEM-T载体并进行核苷酸序列测定。根据C-株、Brescia和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导，同时进行了同源性比较，绘制了系统关系发生树。结果表明，所测4个分离株的CSFV E2基因的长度均为1128 bp，编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列，共由376个氨基酸残基组成。4个分离株之间E2基因的核苷酸序列同源性为89.3％～99.9％，所推导的氨基酸序列同源性为91.5％～99.7％。4个分离株E2基因与C株疫苗毒E2基因的核苷酸序列同源性为82.6％～83.2％，所推导的氨基酸序列同源性为88.1％～89.9％，这说明发生在河南省的猪瘟毒株与C疫苗株的E2蛋白之间存在一定差异。 3．DNA疫苗的构建。猪瘟病毒HNXX株E2基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游，构建成pcDNA4.0-E2猪瘟DNA疫苗。采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞，用荧光染色鉴定和FACS检测细胞瞬时表达的目的蛋白。试验结果显示，CSFV E2囊膜蛋白在293T细胞膜上进行了瞬时表达。 4．动物试验。用构建的重组真核表达质粒pcDNA40-E2免疫Balb/c小鼠、家兔和仔猪。用ELISA方法检测小鼠血清中抗E2蛋白的抗体，家兔用兔体交互试验检测中和性抗体，并进行攻毒试验，免疫仔猪用ELISA方法检测抗体，并进行本动物攻毒试验。结果显示，该DNA疫苗免疫小白鼠能诱导机体产生了抗CSFV E2蛋白的抗体。兔体交互试验表明，免疫家兔最少可抵抗10个最小感染剂量(MID)的猪瘟兔化弱毒苗的攻击；用构建的DNA疫苗免疫仔猪后，免疫猪产生了抗猪瘟抗体，用分离株强毒攻击，结果显示可抵抗致死剂量的CSFV分离强毒的攻击。为进一步探讨基因免疫用于猪瘟核酸疫苗的研制奠定了基础。