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目的:研究小半夏加茯苓汤醇提物对胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡以及侵袭迁移的影响、并且对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及TGF-β/Smad信号通路相关基因TGFβ1、Smad2、Twist1和Snail的影响,探讨该复方体外抑制SGC-7901侵袭转移的分子机制,为临床应用该复方辅助治疗肿瘤疾病提供理论支撑和实验依据。 方法:制备小半夏加茯苓汤醇提物,运用倒置相差显微镜观察小半夏加茯苓汤醇提物对胃癌细胞SGC-7901在TGF-β1细胞因子刺激下形态的影响;运用CCK-8法分别检测不同浓度的小半夏加茯苓汤醇提物对SGC-7901的抑制作用,并计算生长抑制率及半数抑制浓度;运用细胞划痕实验、Transwell实验观察小半夏加茯苓汤醇提物对在TGF-β1细胞因子刺激下SGC-7901侵袭、迁移的影响;运用TUNEL法检测600μg/mL、800μg/mL的小半夏加茯苓汤醇提物对SGC-790124h凋亡的影响;运用实时荧光定量PCR检测600μg/mL、800μ/gmL的小半夏加茯苓汤醇提物对SGC-7901在TGF-β1细胞因子作用下E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及TGF-β/Smad信号通路相关基因TGF-β1、Smad2、Twist1和Snail等表达的情况。运用Western Blot检测600μg/mL、800μg/mL的小半夏加茯苓汤醇提物对SGC-7901在TGF-β1细胞因子作用下TGF-β/Smad信号通路中相关蛋白Vimentin和Snail表达的情况。采用SPSS23.0统计软件进行统计分析 结果:1、CCK-8法检测发现不同浓度的小半夏加茯苓汤醇提物对SGC-7901均有不同程度的抑制作用(P<0.01),并且有浓度时间依赖性;小半夏加茯苓汤醇提物作用于SGC-790124h、48h的半数抑制浓度分别为506.533μg/mL和483.212μg/mL。2、细胞观察发现,经TGF-β1细胞因子刺激分别培养0h、24h、36h和48h后,部分SGC-7901细胞失去上皮细胞原有的典型的鹅卵石样、铺路石样形态,呈较为明显的梭形及纺锤体形改变,细胞伪足增多变长,细胞排列较为松散杂乱。小半夏加茯苓汤醇提物中剂量组和大剂量组均可抑制该过程,使胃癌细胞恢复上皮样细胞形态。3、TUNEL法检测发现,与同时段的空白对照组相比,小半夏加茯苓汤醇提物组有促进细胞凋亡的作用,并且细胞凋亡率随着浓度的增大和时间的延长而升高。4、划痕实验和Transwell实验发现,小半夏加茯苓汤醇提物能够抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭和迁移,并且与浓度时间呈正相关。5、实时荧光定量PCR法检测发现,与TGF-β1模型组相比,小半夏加茯苓汤醇提物中剂量组、大剂量组均能扭转EMT相关基因的相对表达量的变化(P<0.05),并且小半夏加茯苓汤中剂量组、大剂量组能够抑制TGF-β/Smad信号通路中相关基因的相对表达量的变化(P<0.05)。6、Western Blot结果显示,与TGF-β1模型组相比,小半夏加茯苓汤醇提物中剂量组、大剂量组均能抑制Vimentin、Snail蛋白的表达,并且与浓度时间呈正相关。 结论:1、小半夏加茯苓汤醇提物对胃癌细胞SGC-7901的增殖有明显的抑制作用,其抑制率与小半夏加茯苓汤醇提物浓度和作用时间呈正相关,并且能够诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的发生。2、小半夏加茯苓汤醇提物能够抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭和迁移。其机制可能是:通过抑制TGF-β/Smad信号通路中相关基因的表达从而扭转EMT的发生,最终抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,为中医散饮降逆法对于胃癌侵袭与转移的治疗提供了借鉴。