【摘 要】
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研究目的:眼眶静脉畸形(OVM)是常见眼眶疾病,严重损害患者外观和视力,OVM的发病原因和机制尚未有文献阐明,本研究基于OVM发生中的关键因子开展研究。研究内容和方法:通过H&E
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研究目的:眼眶静脉畸形(OVM)是常见眼眶疾病,严重损害患者外观和视力,OVM的发病原因和机制尚未有文献阐明,本研究基于OVM发生中的关键因子开展研究。研究内容和方法:通过H&E染色和免疫组织化学染色法观察病变静脉和正常静脉的形态学差别,采用酶联免疫吸附测定法检测OVM患者和健康人血清中骨形态发生蛋白9(BMP9)的表达水平差异。用不同浓度梯度的BMP9处理脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别用活细胞计数法、Transwell迁移实验和体外管道形成实验检测HUVEC的增殖、迁移和体外成管能力。用不同浓度梯度的BMP9处理脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC),采用定量实时PCR、细胞免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测BMP9对HUVSMC表达重要结构蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结蛋白(DESMIN)的调控作用。运用基于RNA的二代测序结合基因集富集分析法对BMP9下游信号通路进行分析,预测BMP9介导的下游信号通路,并用WB在细胞系中验证。采用小分子抑制剂和小干扰RNA分别阻断受体和下游信号通路关键节点,验证BMP9在细胞中发挥作用的信号通路。最后利用CRISPR/Cas9技术构建BMP9敲除的c57小鼠,观察其体内血管壁和气管壁平滑肌结构。研究结果:OVM患者血清中BMP9水平显著低于健康人,BMP9可抑制HUVEC迁移能力,促进HUVEC体外成管能力,但对其增殖能力无明显作用。BMP9可通过激活ALK1-SMAD1/5-ID1信号通路,促进HUVSMC表达α-SMA和DESMIN,该作用可被ALK1受体抑制剂、SMAD1/5磷酸化抑制剂和靶向ID1的si RNA所阻断。BMP9-/-的c57小鼠体内肺小静脉壁、肠系膜静脉壁和肺小支气管壁α-SMA表达水平较BMP9+/+小鼠均明显下调。结论:我们发现BMP9可能与OVM发生相关联,它可维持血管内皮细胞静息状态,同时通过增强血管平滑肌细胞的功能而稳定血管壁结构,BMP9的缺乏可促进OVM发生。本研究为OVM的发病机制研究提供了新思路,为靶向BMP9及其下游因子防治OVM提供了可能。
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