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本文研究目的:通过研究华蟾素对慢性乙肝患者和正常人外周血来源的DCs形态、表型和功能的影响,从DCs的分子细胞水平阐述华蟾素提高机体免疫力的作用机制。
研究方法:分离慢性乙肝患者和正常人外周血单核细胞(Monocytes,Mo),以GM-CSF和IL-4联合诱导培养生成DCs。实验共分成4组:正常对照组、正常人华蟾素组、慢性乙肝患者组和慢性乙肝患者华蟾素组。两华蟾素组于DCs培养48小时后加入华蟾素。各组DCs均于培养的第7天拍照比较形态的异同;用流式细胞仪检测表面分子CD40、HLA-DR、CD80、CD86的表达水平;用CCK8法检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;用ELISA法检测DCs培养液上清中IL-12的水平。
研究结果:
1)与正常人相比,慢性乙肝患者外周血来源的DCs细胞数少,细胞体积较小,形态相对规则,表现为不成熟状;华蟾素组DCs与相应的对照组比较细胞数相对多,体积相对大,形态相对不规则。
2)慢性乙肝患者外周血来源DCs的表面分子(HLA-DR、CD40、CD80和CD86)的表达水平较正常人低(P<0.05);华蟾素组DCs与相应的对照组比较表面分子表达水平高,其中CD40、CD80和CD86的差异具有统计学意义(P<0.05),而HLA-DR的差异无统计学意义(P>0.05)。
3)慢性乙肝患者外周血来源的DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力较正常人低(P<0.05);华蟾素组DCs与相应的对照组比较刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力增强(P<0.05)。
4)慢性乙肝患者DCs培养液上清中IL-12浓度较正常人低(P<0.05);华蟾素组DCs与相应的对照组比较DCs培养液上清中IL-12浓度增高。
5)慢性乙肝患者华蟾素组和正常对照组比较,表面分子的表达水平、刺激淋巴细胞增殖的能力及分泌IL-12的能力均低(P<0.05)。
研究结论:慢性乙肝患者外周血来源的DCs与正常人相比,细胞形态相对不成熟,表面分子表达水平低,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌能力弱;加入华蟾素共孵育的DCs与相应的对照组比较,细胞形态相对成熟,表面分子表达水平增高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌能力增强。提示:慢性乙肝患者外周血来源DCs存在功能缺陷,华蟾素能改善慢性乙肝患者和正常人DCs的功能,从而增强抗HBV免疫能力。