【摘 要】
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对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是由对虾白斑综合症病毒(WSSV)引起的以感染对虾甲壳内侧出现直径为0.5～2 mm大小的白色斑点为主要特征的暴发性传染病。
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对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是由对虾白斑综合症病毒(WSSV)引起的以感染对虾甲壳内侧出现直径为0.5～2 mm大小的白色斑点为主要特征的暴发性传染病。该病感染率和死亡率都极高,给养虾业造成了巨大的经济损失。WSSV具有广泛的宿主范围,在甲壳纲和昆虫纲动物中均有其敏感的宿主,以虾、蟹等十足目类为多。病毒粒子是椭圆形的杆状病毒,其大小为80-120×250-380nm。WSSV是一种具有囊膜无包涵体的双链DNA病毒,约为300Kbp,是造成自1993年以来我国大面积暴发对虾病毒性疾病的主要病原。该病传播速度快,感染虾群在3～7d内死亡率高达90～100%,对我国及世界的对虾养殖造成了严重的危害,而目前尚未有有效的防治方法。囊膜蛋白是病毒感染与致病力的重要决定因子,WSSV的囊膜蛋白与细胞受体的关系及其作用机理目前尚不清楚。WSSV有个主要的囊膜蛋白VP28,VP28蛋白己被证明在病毒的吸附、侵入过程中起着重要的作用。目前VP22/26是囊膜还是核衣壳蛋白还存在争议。病毒的入侵需要病毒与细胞表面受体的特异性结合,而囊膜蛋白的特异性抗体与病毒粒子的结合阻遏了病毒与细胞受体的结合,进而影响了病毒的吸附、侵入或脱衣壳过程。现已有研究证明利用大肠杆菌表达的WSSV的囊膜蛋白VP28免疫兔子制备的抗血清在对虾体内具有一定中和病毒的能力。本实验参考GenBank上发表的WSSV囊膜蛋白基因VP22/26和VP28的序列,应用Premier5.0软件在起完整的阅读框架外设计并合成两对引物,应用PCR扩增得到VP22/26和VP28两基因,大小均为615bp。分别将VP22/26,VP28用和BamHⅠ和HinDⅢ进行酶切,再按正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,构建出重组表达载体pET-VP22/26和pET-VP28并转化大肠杆菌DH5α。挑白斑筛选重组子,手工提取质粒,经初步鉴定为阳性重组子,转化大肠杆菌BL21(DE3)。进行序列测定和分析,结果与Genbank上的序列一致。基因工程菌经30℃,0.3mmol/LIPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,得到大约28kDa左右的蛋白带,与预期的相符。
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