猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因编码该病毒结构蛋白，是区分PCV1和PCV2的重要区域，具有良好的抗原性。本研究利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达PCV2ORF2编码的结构蛋白，经SDS-PAGE分离目的蛋白并切胶纯化后作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠，三次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经间接酶联免疫吸附实验(ELISA)方法筛选，采用有限稀释法进行亚克隆3次，最终获得4株稳定分泌抗PCV2ORF2重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为D2A1、H4G2、B10H10和G2G1。经ELISA试验检测，其腹水效价分别达到1：2.56×106、1：3.2×105、1：3.2×105、1：3.2×105。亚型鉴定4株单克隆抗体均属IgG2a亚型，其轻链均为κ链。Westernblot鉴定表明获得的4株单克隆抗体均能特异性的识别40ku的重组PCV2ORF2蛋白。间接免疫荧光试验表明，单抗D2A1株与PCV2的反应为阴性，H4G2、B10H10和G2G1反应为阳性，表明后3株单抗能够识别PCV2ORF2蛋白表位。D2A1和B10H10，D2A1和G2G1，B10H10和G2G1混合检测时，OD450值比其中任何一种单抗单独测定时的OD450值高。由此推测D2A1、B10H10和G2G1是针对不同的抗原表位。PCV2ORF2蛋白单克隆抗体的成功制备为进一步研究其抗原表位的结构和功能及建立诊断技术奠定了物质基础。