禽致病性大肠杆菌(APEC)是引起家禽、鸟类等大肠杆菌病的主要的病原体,世界上每年因其导致的经济损失不可估量。近些年来,抗生素的耐药性问题日益严重,其药物残留问题也日益突出,使噬菌体及其制剂作为备选的抗菌方法被人们重新关注。然而,噬菌体相对特异的裂解谱以及有限的基因组信息等大大限制了噬菌体的临床应用。在本次试验中,我们一共分离到了 23株禽源性的大肠杆菌噬菌体,并通过宿主谱测定,筛选出一株较为广谱的噬菌体QL01(41/78),通过对其进行生物学性质试验、基因组测序、比较基因组学分析以及临床上治疗禽大肠杆菌感染的应用研究,为噬菌体广谱机制的探索以及临床应用提供了依据。1禽致病性大肠杆菌噬菌体的分离及生物学性质研究我们通过在南京某些农贸市场采集鸭粪样品,进行噬菌体的分离鉴定。共分离到23株禽致病性大肠杆菌噬菌体,并通过宿主谱测定,筛选出一株较为广谱的噬菌体QL01,可以裂解78株禽致病性大肠杆菌中的41株(52.6%)和1株新生儿脑膜炎大肠杆菌RS218。通过在透射电镜下对其进行形态观察,发现QL01的头部为二十面体结构(大小约为112×78 nm),具有收缩性的尾部(大约为102×20 nm)和6根尾丝。形态显示QL01属于有尾噬菌体目(Caudovirales)的肌尾噬菌体科(Myoviridae family),是一株典型的T4-like噬菌体。用固体培养法进行增殖,得到QL01的最高效价为5.08×108PFU/mL,温度敏感性试验表明QL01对高温较为敏感,其最佳感染复数为1。2噬菌体基因组测序及比较基因组学分析通过Illumina MiSeq对QL01进行全基因组测序,结果显示,噬菌体QL01基因组由一条全长为170,527 bp的双链DNA构成,GC含量为39.6%,有275个可能的ORF,其基因组与噬菌体Bp7,JS98等同源性较高。其中,分别编码IP9和IP8的ORF142和ORF143,在很多T4-like噬菌体中并不常见,仅存在少数噬菌体中。其IP基因数量和种类与低温噬菌体vB_EcoM_VR5相同,表明可能两者间发生了基因水平转移现象。IP基因分布图表明,两株噬菌体IP8和IP9附近基因排布类似,而IP7和IP3附近发生了重排。3 QL01治疗禽大肠杆菌感染的初探为研究噬菌体QL01在临床上对禽大肠杆菌感染的治疗效果,用禽致病性大肠杆菌菌株XM建立感染模型,首先进行半数致死量的测定。通过计算得到其半数致死量为2.12×104CFU。通过反复试验,将感染剂量定为3.6×104CFU左右。人工感染一周龄的雏鸭,并通过不同给药方式进行噬菌体给药,结果表明采用肌肉注射给药组的治疗效果较好。将90只雏鸭随机分组,感染大肠杆菌后进行肌肉注射给药,观察噬菌体的治疗效果。结果显示,噬菌体给药组平均存活率为90%,未给药组平均存活率为63.33%,给药组死亡率明显低于未给药组(P<0.05),而且给药组与阴性对照组之间并无显著差异(P>0.05)。由此可见,噬菌体QL01可以在一定程度上减轻细菌的感染,降低感染雏鸭的死亡率,为临床上应用噬菌体治疗禽致病性大肠杆菌感染提供了依据。