miR-1290通过靶向抑制SOCS4基因的表达促进肺腺癌细胞增殖和侵袭的研究

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肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。在我国,肺癌已成为影响居民健康的主要恶性肿瘤,其发病率和死亡率持续升高。早期肺癌检出率低,75%以上的患者确诊时已为晚期,5年生存率不足15%。肺癌中肺腺癌约占40%。  成熟的microRNAs(miRNAs)是一类高度保守,长度约18~23个核苷酸的单链非编码小分子RNA,通过降解mRNA或抑制蛋白质翻译发挥转录后调节功能。miRNA与肿瘤形成密切相关,其可影响细胞周期以及细胞分化、增殖、凋亡和侵袭等生物学行为。miRNA可能成为临床肿瘤诊断和治疗的新的靶标。  miR-1290是一种新发现的miRNA,由ALDH4A1基因的第一个内含子所编码。目前,有报道miR-1290在食管癌和胰腺癌中高表达,且发挥一定的生物学功能。本实验室前期研究发现肺腺癌患者肿瘤组织和血清中miR-1290表达水平升高,且与肿瘤分期、淋巴结转移及预后相关。  目的:  本研究旨在探讨miR-1290对肺腺癌细胞生物学行为的影响及其相关的分子机制。  方法:  以慢病毒为载体介导miR-1290转染肺腺癌细胞SPC-A1,puromycin筛选,有限稀释法克隆,并经荧光鉴定和荧光定量PCR分析,挑选稳定表达miR-1290的SPC-A1细胞克隆。采用CCK-8法和流式细胞术检测过表达miR-1290的SPC-A1细胞的增殖、凋亡及细胞周期。Transwell实验检测过表达miR-1290的SPC-A1细胞的侵袭能力。通过裸鼠皮下移植瘤形成实验进一步在体内探讨miR-1290对肿瘤细胞增殖的影响。  采用靶基因预测软件TargetScan预测miRNA可能的靶基因,通过荧光素酶报告基因、Western blot和荧光定量PCR等实验明确miRNA调控的靶基因。应用基因干扰技术研究miRNA对靶基因调控的分子机制。最后,对32例肺腺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织内miR-1290以及SOCS4基因的表达进行荧光定量PCR检测,分析其与肺腺癌临床特征的关系,以及两者表达量之间的相关性。  结果:  1) miR-1290能促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭,并抑制其凋亡。  2) SOCS4是miR-1290的靶基因,miR-1290可通过抑制SOCS4的表达促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭。  3)肺腺癌患者肿瘤组织中miR-1290表达升高,SOCS4表达降低,两者呈负相关。miR-1290和SOCS4的表达水平与肺腺癌肿瘤分期及转移相关。  结论:  本研究结果表明肺腺癌组织中miR-1290高表达,其可通过抑制靶基因SOCS4的表达促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭,提示miR-1290是潜在的肺腺癌治疗的新的靶点。
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