淡色库蚊和鲫鱼体内乙酰胆碱酯酶的生物化学性质比较研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nibaba
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文以淡色库蚊(Culexpipienspallens)和鲫鱼(Carassiusauratus)为研究对象,系统研究了淡色库蚊和鲫鱼体内乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的生物化学特性及其对抑制剂的敏感度以及一些杀虫药剂对淡色库蚊幼虫的毒力。用亲和柱层析技术对雌雄鲫鱼鱼脑AChE进行了纯化,比较分析了鲫鱼性别之间的差别;并对雌雄鲫鱼鱼脑AChE基因进行了克隆和序列分析。研究结果如下: 1.研究了淡色库蚊体内和雌雄鲫鱼脑部AChE的粗酶液对碘化硫代乙酰胆碱(ATCh)、β-甲基硫代乙酰胆碱(β-MTCh)、丙酰硫代胆碱(PrTCh)、丁酰硫代胆碱(BuTCh)4种底物专一性,根据Km值,淡色库蚊的AChE对4种底物亲和性的差异不显著(P<0.05),而鲫鱼脑部AChE对4种底物亲和性的差异显著(P<0.05),其中对ATCh的Km最小,Vmax最大。Vmax显示,淡色库蚊和鲫鱼的AChE对4种底物水解效率的高低顺序为ATCh>PrTCh>β-MTCh>BuTCh。 2.毒扁豆碱、DDVP、涕灭威和灭多威对淡色库蚊AChE以及3种氨基甲酸酯类农药对雄性和雌性鱼脑AChE抑制的时间进程曲线是一致的。通过比较8种杀虫药剂对淡色库蚊和鲫鱼AChE的IC50值,发现淡色库蚊和鲫鱼的AChE都对克百威的敏感度最高,对涕灭威最低。 3.基于LC50值的比较,在实验内测定了9种药剂对淡色库蚊幼虫的毒力,淡色库蚊对毒死蜱的敏感度最高,LC50值为0.001μg/mL,对硫双灭多威的敏感性最低,LC50值为0.957μg/mL。灭多威、硫双灭多威、克百威,丁硫克百威等4种药剂对AChE的抑制能力(ki值和IC50)与其对淡色库蚊毒力(LC50)值没有一致的对应关系。 4.以ATCh和BuTCh作为底物检测雌雄鲫鱼体内不同组织器官中AChE和BuChE的活性,发现脑部所含的AChE的比活力最高,占所有组织的50%以上;鲫鱼的肌肉中不但存在水解ATCh的AChE,也存在水解BuTCh的BuChE。 5.比较研究了不同性别鲫鱼脑AChE对灭多威、硫双灭多威、克百威,丁硫克百威等4种氨基甲酸酯类杀虫剂的敏感度,硫双灭多威对雌鱼AChE的ki值显著高于其对雄鱼的ki值;4种药剂对雌鱼脑AChE的k2值都显著大于对雄鱼脑AChE的k2值。丁硫克百威抑制雌鱼脑AChE的氨基甲酰化AChE的恢复速率明显比雄鱼脑AChE快(基于k3值的比较)。 6.研究了氯磷定(2-PAM),双磷定(TMB4),双复磷(OBI)和酰胺磷定(HI-6)等4种AChE恢复剂对鱼脑磷酰化AChE的恢复能力。基于重活化率的比较,OBI对甲胺磷抑制AChE的恢复效果最好;OBI和TMB4对毒死蜱抑制AChE的恢复效果好,2-PAM对DDVP抑制AChE的恢复效果最好。恢复剂本身对AChE的活性都有一定的抑制作用,其中双磷定(TMB4)对AChE的抑制率最高,在实验条件下达到44.9%,HI-6对AChE的抑制率最低为11.5%。 7.用亲和层析的方法对雌雄鱼脑AChE进行了较好的纯化,对雌雄鱼纯化倍数分别为1521倍和2089.5倍。对纯化前后的雌雄鱼脑的AChE的生物化学特性及对药剂的敏感性进行了比较,雌雄鲫鱼纯化后AChE对ATCh亲和力比纯化前增加了(基于Km值的比较),纯化后的AChE对DDVP和丁硫克百威的敏感度明显增加100倍左右。 8.通过RT-PCR分别克隆了鲫鱼脑AChE基因片段,长度为1060bp,编码353个氨基酸(Genbank上注册号为AY847745),并对其进行了生物信息学的分析。
其他文献
企业的精神文化是企业文化建设的内核,每个企业都有自己内在的精神气质和独特的个性特征.但精神文化作为一种价值理念,其认知认同又有许多相通之处,体现着人类精神的内涵和时
民间叙事一个特点是突出个人情感的作用,往往以情感为中心来组织故事情节,“英雄美人”是在民间思想滋养下形成的一个经典的叙事模式.英雄都有高超的武功,往往有美人相伴是这
本文主要结合多年的测量工作经验,对建筑工程施工测量作了探讨。首先分析了施工测量内容,其次建筑工程测量原则和程序,在此基础上提出了建筑施工测量技术。 This article ma
根据“优先结构(privileged structure)”理论及脲嘧啶类化合物在除草剂创制中应用情况,设计并合成了以下7个系列的尿嘧啶衍生物: 所得的化合物结构均经过熔点、红外光谱、H
改革开放四十年,我国高校英语教育成绩斐然.这表现在英语恢复了它在我国高校中曾经的第一外语地位;高校英语专业的培养目标和课程设置重视与国家需要相结合;在教学内容和方法
期刊
近年来,随着土地资源的日益紧张,建筑开始向地下部分延伸,而且层数也呈不断增加的趋势。在地下建筑不断的建筑过程中,人们对地下建筑的质量越来越关注。在传统的施工方法中,
要更深入系统地讨论我国当下的英语学科定位问题,有必要将其置于一个历史和比较的语境下进行.过去四十年国内外英语教育经历了波澜壮阔的变革.国际上,以英美为中心的英语规范
期刊
随着中国教育体系的发展,学生的基础教育尤为重要.新课标以教学中师生的“双边”理论为核心,指出了教师是“教”而学生是“学”的角色关系.这表明了在课学习中教师和学生之间
我国改革开放四十年,外语专业教育为国家和社会培养了大批高素质的外语人才,众所周知,所有国内人学习外语,都是外语老师教出来的,而几乎所有的外语老师,无论小学、中学还是大
期刊
随着科学技术的发展,增强现实技术的广泛普及应用.传统课堂的讲授方式正在逐渐发生变化,以适应学习者的学习要求.技术方面AR+VR技术已走向成熟能为学习者提供身临其境的学习