呋喃西林胁迫对扇形游仆虫抗氧化物酶活性、基因表达及蛋白表达的影响

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集约化水产养殖水体中渔药的大量使用会导致环境污染等系列生态问题。有关渔药生态毒性监测和风险评估成为环境科学研究领域关注的焦点之一。为筛选有效生物标记物并探讨渔药的生态毒性,本研究以海洋纤毛虫原生动物扇形游仆虫(Euplotes vannus)为模型生物,探讨了主体药物呋喃西林对抗氧化物酶活性、基因表达和蛋白表达水平的影响。  主要研究内容:(1)探讨了梯度浓度呋喃西林(0、3、6、12和24mg/L)和不同暴露时间(6、12、18和24h)条件下,扇形游仆虫超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)酶活性的变化;(2)克隆了扇形游仆虫MnSOD和GPx cDNA全长序列,利用实时荧光定量PCR技术测定了呋喃西林对MnSOD、GPx基因表达水平的影响;(3)测定了呋喃西林对扇形游仆虫MnSOD、GPx蛋白表达水平的影响;(4)测定了呋喃西林对扇形游仆虫SOD、GPx酶活力和基因水平的毒物兴奋效应。  研究结果表明:(1)呋喃西林对扇形游仆虫SOD和GPx酶活性具有显著的剂量关系,且剂量关系显著的受暴露时间的影响;(2) MnSOD cDNA全长780bp,编码223个氨基酸,蛋白理论等电点(p1)为6.80,预测的分子量为25.44KDa,属于Mn-SOD家族;GPx cDNA全长672bp,编码182个氨基酸,蛋白理论等电点(pI)为4.40,分子量约为20.34KDa,属于硫氧还蛋白超家族;呋喃西林对扇形游仆虫MnSOD、GPx基因表达均具有显著影响(P<0.05),表现为显著的剂量效应、时间效应和剂量、时间的交互作用;(3)以时间为变量,MnSOD、GPx蛋白表达水平均出现中间高两边低的趋势。(4)呋喃西林对扇形游仆虫抗氧化酶具有显著的毒物兴奋效应。呋喃西林暴露对扇形游仆虫SOD酶活力和mRNA水平的毒物兴奋效应表现为典型的倒U型曲线,且具有时间效应;对GPx酶活力仅检测到呈线性相关的刺激作用,而对GPx mRNA的表达同样表现出典型的倒U型曲线,且具有时间效应。  结论:呋喃西林对扇形游仆虫超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶酶活性、基因表达水平和蛋白表达水平具有剂量效应,且受暴露时间的影响;超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及基因表达在呋喃西林胁迫下具有典型的毒物兴奋效应。
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