目的：　　探讨清开灵注射液对人食管癌 Ec-109细胞生长的影响，及内质网应激在诱导Ec-109细胞凋亡中的作用和相关分子机制。　　方法：　　1、四氮噻唑蓝法（MTT法）检测清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞增殖活性的影响：用不同剂量的清开灵注射液（清开灵注射液的剂量用完全培养基稀释倍数来表示，清开灵低剂量为1/100；清开灵中剂量为1/75；清开灵高剂量为1/50）分别作用于Ec-109细胞不同的时间长度（包括12h、24h、36h、48h），并且设立阴性对照组（用等体积的完全培养基处理细胞）和阳性对照组（5氟尿嘧啶，用药浓度为500μg/ml），通过观察各组细胞形态学变化和计算细胞增殖抑制率等，比较分析清开灵注射液对人食管癌Ec-109细胞生存率的时效和量效关系。　　2、免疫荧光染色法检测清开灵注射液作用于人食管癌Ec-109细胞后细胞凋亡状况：细胞贴壁后加入正常培养基（阴性对照组）和同体积含1/100、1/75的清开灵注射液的培养基（清开灵用药组）处理细胞24h和48h，AO/EB染色后在荧光显微镜下观察细胞凋亡状况。　　3、流式细胞分析技术检测细胞凋亡率和细胞生长周期：细胞贴壁后加入正常培养基（阴性对照组）和同体积含1/100、1/75的清开灵注射液的培养基（清开灵用药组）处理细胞24h和48h，用流式细胞分析技术检测细胞周期和细胞凋亡率。　　4、免疫印迹法（Western Blot）对细胞内相关蛋白表达水平的测定：细胞传代至培养瓶贴壁后，分别用正常培养基和同体积含1/100、1/75的清开灵注射液的培养基处理细胞24h和48h，提取细胞总蛋白，免疫印迹法检测细胞内相关周期蛋白（CyclinB1、CDK1）和内质网应激凋亡通路的相关蛋白（Caspase-4、CHOP）表达情况。　　结果：　　1、 MTT法实验结果显示：清开灵注射液处理人食管癌Ec-109细胞后，与阴性对照组相比，结果具有显著的统计学意义（P﹤0.05），其中能表明清开灵注射液对食管癌Ec-109细胞量效关系的直线回归方程为：Y=31.567X+0.1522，R2=0.999，P=0.000﹤0.05。　　2、免疫荧光染色法实验结果显示：清开灵注射液处理人食管癌Ec-109细胞后，在倒置荧光显微镜下观察发现，清开灵注射液用药组细胞与阴性对照组相比，有较多的凋亡，表现为部分细胞核染色质被染成橘红色，同时可见部分细胞缩小或呈半月形等。　　3、流式细胞仪对细胞周期和凋亡率检测表明：用清开灵注射液处理人食管癌Ec-109细胞后，与阴性对照组相比，分布在 G2/M期的细胞数明显增加，经过统计学分析，差异具有统计学意义（P﹤0.05）；与阴性对照组相比，清开灵注射液组细胞的凋亡率明显增加，其数据差异具有统计学意义（P﹤0.05）。　　4、 Western Blot实验结果显示：相关细胞周期蛋白CyclinB1和CDK1的表达量，与阴性对照组相比，清开灵注射液用药组明显减少，并且用药剂量越大、作用时间越长，表达量越少；而与内质网应激相关的蛋白Caspase-4、CHOP的表达呈增多趋势，对所得数据进行统计学分析，差异具有有统计学意义（P﹤0.05）。　　结论：　　1、清开灵注射液能明显的抑制人食管癌Ec-109细胞的生长，主要表现在诱导凋亡和抑制增殖两方面，且具有剂量和时间相关性。　　2、清开灵注射液抑制人食管癌 Ec-109细胞增殖的机制可能与相关周期调控因子CyclinB1和CDK1高表达导致细胞阻滞于G2/M期有关。　　3、在清开灵注射液诱导人食管癌Ec-109细胞凋亡过程中，内质网应激相关蛋白Caspase-4、CHOP的表达明显升高，内质网应激通路被活化，Ec-109细胞的凋亡与内质网应激途径可能有关。