小麦TaSPX129基因的克隆、表达及生物信息学分析

来源 :四川师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangwang1986
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本研究以普通小麦杨麦5号为研究材料,构建了一个cDNA文库,经测定文库原始滴度为2.29×106pfu/ml,扩增文库滴度为4.5×109pfu/ml。利用小麦EST CN012370的序列合成的探针,从该cDNA文库中筛到了一个cDNA克隆。该cDNA。长1748bp,含一个1317 bp的开放阅读框,编码由439个氨基酸组成,在氨基酸序列水平上与之高度同源的基因含有SPX结构域,所以将该cDNA命名为TraSPX129。然而经过保守结构域搜索发现,该cDNA的编码产物具有MFS超级基因家族的特征结构域,而且属于MFS_1家族。 MFS超家族是一个以转运水溶性小分子物质为主、功能多样的蛋白质超级家族,其中不少成员是药物抗性蛋白。含SPX(SYG1/Pho81/XPR1)结构域的蛋白质在酵母及动、植物等真核生物中都曾发现,研究表明它们在生物体的信号转导过程中具有重要用,该结构域的主要功能是蛋白质与蛋白质之间的相互作用,但绝大多数该类蛋白的功能还未知。目前得到克隆的同时具有MFS和SPX两种结构域的基因很少,其确切功能研究的信息更是非常匮乏。 生物信息学分析表明,TaSPX129蛋白质的理论分子量是47.31kD,等电点4.90,二级结构主要由53.08%的α-螺旋及25.51%不规则盘绕构成。该cDNA的编码产物与水稻、拟南芥等植物中含SPX结构域的蛋白质高度同源,具有多个明显的疏水区域,整个肽链表现为疏水性,并显示在二级结构中有9个跨膜区域,说明TaSPX129蛋白是一个跨膜蛋白。同时,TaSPX129蛋白具有天冬酰氨糖基化位点和蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点,保守结构域分析也显示其具有一个糖分子转运功能的结构域。与TaSPX129同源的EST中27.8%来自病原菌诱导的cDNA文库,50.5%来自非生物逆境诱导的cDNA文库。综合判断,TaSPX129可能作为一个G蛋白耦联的信号转导过程中的跨膜蛋白,参与小麦的抗病或抗逆境胁迫反应。进一步实验检测应用半定量反转录PCR(RT-PCR),以小麦中Tubulin基因为内参照建立稳定的RT-PCR反应体系,首先检测了不同小麦品种在水分胁迫和胁迫下TaSPX129基因的表达。结果表明,渗透胁迫下TaSPX129在小麦抗旱品种中的表达量高于其它品种,该基因的表达也受到SA诱导,其表达量随诱导时间而稳定增加。说明TaSPX129基因的确与小麦的抗病、抗旱等抗逆性相关。进一步的功能研究本实验室正在研究之中。
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