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目的:脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)是脉络膜病理性新生血管侵入视网膜下腔或色素上皮(pigment epithelium of retina,RPE)下而形成的,是国内外致盲的主要疾病之一,成为困扰目前眼科界的难题。大量实验证实,炎症与CNV存在密切关系。因炎症而激活的炎细胞释放的各种血管生长因子和蛋白酶等形成了一个复杂的网络体系,极大推动了CNV的发生发展。塞来昔布是一种常见的非甾体类消炎药,为高选择性环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂,有研究认为它能够显著减少肿瘤组织中新生血管形成从而抑制肿瘤的发生和扩散。本文采用激光诱导CNV动物模型,通过观察CNV中COX-2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor , VEGF)和基质金属蛋白酶-2 ( matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的变化规律,以及COX-2抑制剂塞来昔布对CNV的抑制作用,从而了解CNV中炎症对新生血管的影响,进一步探讨CNV的发病机制和治疗方法。方法:1实验性大鼠CNV模型研究1.1通过对10只健康棕色挪威(Brown Norway,BN)大鼠(每只大鼠一眼为实验眼,另眼为对照眼),氪激光(波长647nm,光斑直径50μm ,功率360mW,曝光时间0.05s)围绕视盘均匀光凝9个点,以见到有气泡产生提示Bruch膜被击穿为准建立大鼠CNV模型。1.2分别于光凝后第3、7、14、21、30d进行荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography,FFA)。1.3造影后6h待其体内荧光素染料大部分被排出后,处死动物,摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片。选取有明确血管化的激光斑连续切片中“最大CNV膜”切片,常规HE染色,并计算CNV膜相对厚度。1.4随机选取光凝后21d大鼠作电镜检查。1.5对实验结果采用SAS V8软件行卡方检验,方差分析等统计分析。2实验性脉络膜新生血管中COX-2、VEGF和MMP-2的表达2.1随机选取光凝后第3、7、14、21、30d的“最大CNV膜”切片,进行COX-2、VEGF和MMP-2免疫组化染色。2.2采用HPIAS-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统测定其染色的平均灰度值,以未受激光光凝眼的组织切片做对照。2.3对实验结果采用SAS V8软件行卡方检验,t检验,正态性检验,相关性分析等统计分析。3塞来昔布抑制实验性脉络膜新生血管的研究3.1 BN大鼠25只,随机分为空白对照组、实验对照组、塞内昔布治疗组。治疗组通过灌胃法给药(塞内昔布50mg/kg,一天两次),1周后实验对照组和治疗组均给予激光光凝(方法同前)建立大鼠CNV模型。3.2各组大鼠分别于光凝后第3、7、14、21、30d进行荧光素眼底血管造影。3.3光凝后第21d随机选取各组大鼠处死,摘除眼球,制作空白对照组球后段组织切片及实验对照组和治疗组的“最大CNV膜”切片。3.4常规HE染色计算实验对照组和治疗组的CNV膜相对厚度。3.5免疫组织化学方法检测COX-2和VEGF及MMP-2在上述三组中的表达。3.6对实验结果采用SAS V8软件行卡方检验,t检验等统计分析。结果:1实验性脉络膜新生血管模型的研究1.1光凝后7d出现CNV,21d达高峰。大鼠CNV发生率高(77.78%)。1.2 FFA表现为造影早期强荧光斑,晚期出现与视网膜血管无关的荧光素渗漏。1.3光镜和电镜下可见到CNV自脉络膜穿过破裂的Bruch膜突向视网膜下,以及巨噬细胞浸润、RPE细胞迁移增生和纤维母细胞增多等。1.4 CNV相对厚度随时间变化也有相应改变,在光凝后7-21d逐渐增加,21d到达高峰,之后变化不显著。2实验性脉络膜新生血管中COX-2、VEGF和MMP-2的表达2.1 COX-2及VEGF、MMP-2在实验组CNV膜中的表达有着类似的表达规律,随时间的发展而阳性表达增加。2.2 COX-2及VEGF、MMP-2均在光凝后7-14d出现明显增加,在21d时达高峰,之后略有下降。2.3实验组COX-2和VEGF以及COX-2和MMP-2的免疫组化染色平均灰度值变化均有明显的相关性。3塞来昔布抑制实验性脉络膜新生血管的研究3.1大鼠眼光凝后21dCNV发生率到达高峰,两组FFA进行比较,治疗组CNV发生率明显低于实验对照组(x2=7.1068 P=0.0077)。3.2光凝后第21d,实验对照组CNV相对厚度与治疗组比较差异具有显著性意义(P<0.01),治疗组CNV相对厚度较对照组减少41.38%。3.3免疫组化结果显示,空白对照组正常大鼠COX-2、VEGF和MMP-2在视网膜和脉络膜中的表达非常弱,光凝后21d,实验对照组COX-2、VEGF和MMP-2在CNV膜上阳性表达明显高于治疗组(P<0.01),治疗组表达水平受到抑制。结论:1氪激光诱导BN大鼠CNV模型具有稳定、可靠、价廉、成模时间短,成模率较高等特点。2激光诱导的CNV中有巨噬细胞等炎细胞浸润,存在明显的炎症反应。3炎症诱导CNV中COX-2的活化,进而上调血管生长因子和蛋白酶的表达。实验性CNV中COX-2、VEGF和MMP-2的表达增多,并且随着COX-2增加,VEGF和MMP-2也增加。4预防性服用选择性COX-2抑制剂塞来昔布能够有效抑制激光诱导CNV的生成,其通过抑制COX-2可减少CNV中VEGF和MMP-2的表达。