棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsidnucleopolyhedrovirus，HaSNPV)是一类双链环状DNA 病毒，其分子生物学和基因功能研究已取得很大进展。开放阅读框99（open reading frame 99，orf99）是HaSNPV的一个功能未知的特有基因，本文首次对HaSNPV G4株基因组中的orf99基因进行初步实验研究报道。　　 Orf99基因和Ha99 蛋白序列通过生物信息学分析表明：orf99基因长为357bp，预计编码118个氨基酸，预测蛋白质分子大小为14．5KDa；orf99基因起始密码子上游-62位和-49位分别存在早期启动子信号序列“CAGT ”和“TATA ”；　　 该基因无信号肽，无跨膜结构；由SMART 分析该蛋白存在铁蛋白类似结构和氧化还原酶活性; 通过PSI-BLAST 比对发现，orf99 仅与美洲棉铃虫HzSNPV orf102同源性高达99％，另外由PHYLOGENETIC TREE 分析得知orf99在Helicoverpaarmigera nucleopolyhedrovirus、 Helicoverpa armigera NPV、 Helicoverpaarmigera NPV NNg1、Helicoverpa zea SNPV 中比较保守，遗传距离比较近，推测他们可能是从同一祖先分支进化的。　　 本试验中，我们用表达载体pGEX-KG 及表达宿主大肠杆菌BL21 对orf99基因进行谷胱甘肽（GST）融合表达，表达产物约为40kDa，与预期的大小相符。　　 另外,我们成功构建了真核表达载体pIZ/V5-His-egfp-orf99,该载体利用荧光蛋白基因egfp 作为报告基因，将orf99和egfp 连接在pIZ/V5-His 上，形成融合表达产物的载体,为进行细胞定位做了准备.　　 为研究orf99基因的功能，我们首先设计一对200bp 左右，含有orf99 上下游基因同源臂，然后以酶切的方法合成可供同源交换的线性片段Phsp70-egfp-SV40-Cm r，借助含有λ噬菌体Red 重组系统的质粒pKD46 及棉铃虫杆状病毒细菌人工染色体HaBacmid，在大肠杆菌BW25113 中进行同源重组通过同源重组，在原核水平将该该基因敲除，构建了orf99基因缺失型重组病毒，在此基础上再进行回复,构建回复型重组病毒，为进一步在昆虫细胞水平研究此基因的功能奠定了基础。