家蚕mago nashi基因的克隆、序列分析及原核表达研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:A58400794
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
生殖质是在许多物种卵子发生中形成的一种特殊细胞质成分,含有这种成分的细胞才能发育为生殖细胞。对果蝇研究表明,magonashi基因是生殖质组装和形成的一个关键基因,其编码的蛋白质能识别并结合某些生殖质决定基因的RNA,形成复合体,穿过核膜进入核质区域,指导生殖质的正确组装形成。从低等的真核生物酵母到高等的哺乳动物人,都存在magonashi的同源基因并且相似性非常高。 为进一步阐明家蚕生殖发育的调控机制,在家蚕基因组、EST数据以及芯片数据分析的基础上,本论文对果蝇中已报道的生殖质决定相关基因在家蚕中的同源基因进行了鉴定,并对其表达模式进行了分析,然后对高度保守的magonashi基因进行了克隆和原核表达,以期为以后深入了解该基因的功能研究奠定基础,获得结果如下: 1.果蝇生殖质决定相关基因在家蚕中的同源基因分析从FlyBase下载果蝇生殖质形成相关基因18个(aubergine,spire,nanos,torso,tudor,vasa,pumilio,par-1,cappuccino,staufen,oskar,valois,germ-cellless,polar-granulecomponent,mtlrRNA,magonashi,tsunagi,exuperantia),通过与家蚕基因组数据进行BLAST比对分析,发现除oskar,valois,germ-cellless,polargranulecomponent,mtlrRNA5个基因外,其余13个基因在家蚕中均有同源基因,并根据基因芯片数据分析了预测的家蚕生殖质形成相关基因的表达模式。发现在这些同源的生殖质形成相关基因中,有5个基因(Bmcapu,Bmnos,Bmvas,Bmaub,Bmexu)在雌雄发育后期有显著差异表达;有4个基因(Bmtud,Bmmago,Bmtsu,Bmstau)在雌雄发育过程中无差异表达;有3个基因(Bmnos,Bmvas,Bmaub)在生殖腺中特异表达;有6个基因(Bmcapu,Bmmago,Bmtsu,Bmexu,Bmstau,Bmtud)除在生殖腺中表达外,还在其它组织有高表达。 2.家蚕magonashi基因的克隆及mRNA表达检测根据预测序列设计引物,进行RT-PCR扩增和克隆测序验证,成功地克隆到家蚕magonashi基因完整的编码区序列。分析发现该基因位于nscaf2655上,只有一个完整的拷贝,在基因组上有1611bp,共有两个外显子,分别为258bp和183bp,并且外显子、内含子边界符合典型的GT-AG结构。克隆的magonashi基因完整的编码区序列为441bp,编码146个氨基酸残基。RT-PCR检测了该基因在发育各时期各组织器官的表达情况,发现该基因在所检测的所有发育时期、组织器官均有表达,是一个非特异表达基因。 3.家蚕magonashi基因的原核表达将家蚕magonashi基因的编码区序列克隆到原核表达载体pET28-a中,并将构建成的pET-magonashi重组质粒转化表达宿主菌EscherichiacoliBL21(DE3)细胞,IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测分析。结果表明,同对照相比,重组质粒在23.5KD处有一条十分明显的新增蛋白带,与预测的蛋白质大小一致,说明该基因体外重组表达成功。进一步的分析发现该重组蛋白主要以包涵体的形式存在。
其他文献
上海深紫外自由电子激光实验装置(ShanghaiDeepUltraviolet-FreeElectronLaseTestFacility,简称SDU-FEL)是一台由电子直线加速器驱动的可调诣、强相干FEL多功能实验平台。真
心血管疾病已经成为威胁人类健康的主要疾病之一。心电图是临床医学用于诊断心脏疾病和分析心电信号的科学依据,心血管疾病的有效治疗很大程度上依赖于心电信号检测与分析的
主要应用膜片钳技术的全细胞和单通道记录模式,研究了甜菜夜蛾(Laphygma exigua)幼虫中枢神经元的兴奋性机制,以及细胞膜电压门控离子通道的特性,并分析了三氟氯氰菊酯(Cyhaloth
三羟异黄酮(Genistein, Gen)是大豆等豆科植物中的一种常见的次级代谢产物,其广泛参与调控人体脂质代谢、糖代谢、抗氧化等多种生理学活动。以肝细胞脂肪变性、细胞内脂肪过度沉积为主要特征的非酒精性脂肪肝病(Nonaleoholie Fatty Liver Disease, NAFLD)是现今最常见的应激性肝损伤疾病之一。脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride Lipase
牛泡沫病毒(Bovine Foamy Virus)属反转录病毒科泡沫病毒亚科泡沫病毒属,在体外虽可使细胞发生强烈病变,在体内却不表现任何病症。该病毒基因组中存在两类启动子,其中LTR启动结
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
随着社会的进步与发展,监控系统作为一种有效地安防手段已经被广泛的应用到各个行业中。传统的单摄像机监控系统只能对固定视野场景进行监控,具有一定的实时性、可靠性。当需要
神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经系统最重要的生物活性分子之一,兼有神经营养因子与促进神经突起生长双重作用,对神经细胞的生长、发育、分化发挥调节作用,是参与损
包装印刷行业面临着提高企业生产效率、降低损耗、提高质量、减少人力资源成本的压力,而通过研究和实现横跨计划层与控制层之间的MES(制造执行系统)层的信息技术应用创新是解除
干旱和低温胁迫严重影响作物生长和发育从而导致作物减产。因此,研究植物抗旱和抗寒具有重要的理论意义和实践价值。前期研究中,发现一个编码拟南芥未知功能蛋白的基因LWT1被低