【摘 要】
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该文首先研制了一种响应速度快的能在线检测发酵液中甲醇浓度的传感器,考察了不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵产水蛭素的影响.在分离纯化并鉴定出水蛭素的四种活性
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该文首先研制了一种响应速度快的能在线检测发酵液中甲醇浓度的传感器,考察了不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵产水蛭素的影响.在分离纯化并鉴定出水蛭素的四种活性异构体后,通过恒化培养的研究探索影响水蛭素降解的因素,最终在分批发酵中实现水蛭素的低降解高表达.针对硅胶管壁厚扩散慢的缺点,使用薄壁的特异性半透膜取代硅胶管,以增强甲醇传感器的扩散传质能力,提高传感器的响应速度.最终研制的甲醇传感器稳定性好,响应时间小于2min,是目前文献报道的响应时间最快的甲醇传感器,并成功应用于重组毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素过程中,通过在线检测控制发酵液中的甲醇浓度,使细胞干重达到155g/L,水蛭素总活性达到1.9×10<'4>ATU/mL.研究中首次发现,细胞的比生长速率μ及甲醇浓度对水蛭素降解有影响.当维持甲醇为限制性浓度（S<3.1 g/L）且μ为0.02～0.048 1/h时,水蛭素降解较少.在μ为0.02 1/h时,Hir65的比生成速率有最大值0.2mg/g/h,此时甲醇的比消耗速率为0.04g/g/h.在毕赤酵母分批流加发酵中,常规发酵工艺导致比较严重的水蛭素降解,发酵末期目的水蛭素Hir65的比例不足10﹪,产量最高只有0.28g/L.通过比生长速率控制后,发酵末期水蛭素的比例仍有27﹪,Hir65的产量达到0.69g/L,是原工艺的2.5倍.
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