论文部分内容阅读
猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)是引起猪繁殖障碍综合症的主要病原,可引起死产、木乃伊胎、胚胎的早期死亡及不孕不育等。除了临床上导致繁殖障碍,猪细小病毒还能引起皮炎、肠道等疾病。作为一个能显著导致经济损失的疾病,近年来猪细小病毒在世界范围内普遍流行,感染和造成的危害呈上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。细胞因子能介导抗病毒状态的建立及募集炎性细胞向感染部位聚集,不仅在抵抗疾病的过程中发挥重要作用,而且是清除感染所必需的。对于猪细小病毒致病机制的研究多集中在病毒的复制及感染过程,而对病毒与细胞间的作用关系、猪细小病毒感染引起宿主细胞因子的变化规律的研究尚未见报道。为了了解猪细胞因子对PPV感染的免疫反应机制,阐明PPV的致病机理,我们进行了以下研究:1.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的PPV DNA水平及IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、iNOS、2-5OAS、RNaseL和IRF-3等干扰素及相关细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现,PPV感染猪外周血淋巴细胞后1 h即能检测到PPV DNA,24 h后PPV开始迅速增殖,在感染后72 h达到峰值,为10倍多。IFNAR-1 mRNA的表达量在1 h、24 h显著增加,其中1 h为89.9倍;IFNAR-2 mRNA的表达量在24 h达到高峰,其他时间无明显差异;IFN-βmRNA的表达量在1 h达到高峰,24 h显著下调;IFN-γmRNA的表达量在48 h显著增加,24 h显著下调;MHC-ⅠmRNA的表达量在1 h、12 h、48 h显著增加,48 h达到高峰;IRF-3、RNaseL mRNA的表达量在48 h显著增加,其它时间表达差异不显著;MX1、2-5OAS mRNA的表达量在24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰;MHC-ⅡmRNA的表达量在1 h、3 h、6 h、12 h显著增加,3 h达到高峰;iNOS mRNA在1 h不表达,3 h表达量显著增加,24 h显著下调。PPV感染可引起猪PBMC分泌抗病毒相关因子显著增加。2.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的IL-1β、6、8、12p35、12p40、13、17和18等炎性细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现PPV感染猪PBMC后IL-1βmRNA的表达量在1h、3 h、6 h、12 h、24 h显著增加,24 h达到高峰为58倍;IL-6 mRNA的表达量在1h、3 h、6 h、12 h、24 h、72 h显著增加,6 h达到高峰为40.5倍;IL-12p35 72 h显著增加,24 h显著减少;IL-12p40 1 h显著增加,24 h显著减少;IL-8在1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰为59.7倍;IL-13在3 h显著增加,12h、24 h显著减少;IL-17在1 h、48 h显著增加,6 h、12 h、24 h显著减少;IL-18在6 h显著增加。PPV感染可引起猪PBMC分泌炎性相关因子显著增加。3.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的TNF-α、TNFR-2、P53、PBR、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-8和FasL等凋亡细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现PPV感染猪PBMC后TNF-αmRNA的表达量在1 h显著增加,随后逐渐降低,24 h显著减少;TNFR-2 24 h显著减少为0.25倍,48 h显著增加为11.5倍;P53在1 h和72 h有轻微增加,6 h、12 h、24 h减少;PBR在1 h、24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰为12.9倍;Bcl-2在1 h有轻微增加,其他时间减少,24 h显著减少;Bcl-xl在24 h显著减少,72 h显著增加;Caspase-8在1 h、24 h显著增加,1 h达到高峰为19.3倍;FasL在1 h显著增加,24 h显著减少为0.02倍。PPV感染可引起猪PBMC分泌凋亡相关因子显著变化。综上所述,本试验分别对PPV在猪PBMC中的增殖规律及PPV感染后猪PBMC干扰素及相关细胞因子、炎性细胞因子、凋亡相关细胞因子的转录时相进行了研究,为进一步了解细胞因子的免疫学作用机制及PPV的分子致病机制提供试验依据,为预防和治疗PPV及相关药物的筛选和研制奠定了理论基础。