目的:随着社会的发展,生活方式及环境等因素的改变,恶性肿瘤发病率有逐年增加的趋势,恶性肿瘤已成为严重威胁人类健康的疾病;而糖尿病患病率明显上升。化疗是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,随着肿瘤晚期患者经化疗生存期的延长,抗肿瘤药物引发的毒副作用的预防及引起的有关疾病的治疗引起了越来越多的关注和研究。国内外有多项研究表明在化疗过程中及化疗结束后,新发糖尿病病人患病率增加,化疗前已存在糖耐量异常或糖尿病的病人病情加重,因此许多学者提出化疗药物可能会直接损伤胰岛细胞功能,从而引发糖耐量异常甚至糖尿病。但多为回顾性研究,少部分动物实验研究经静脉、腹腔注射化疗药物等多种给药途径测定静脉血糖及胰岛素分泌水平,但是上述研究均存在过多的干扰因素,如:肾上腺皮质激素、巨噬细胞集落刺激因子的应用、胰岛素抵抗等,尚缺少化疗药物对体外原代培养的胰岛细胞功能影响的证据。丝裂霉素是临床上常用的化疗药物之一,用于多种肿瘤的化疗。目前我们前期试验进行了动物体内试验研究证实丝裂霉素可损伤胰岛细胞功能,本研究采用对短期正常饲养的Wistar大鼠剖腹提取胰腺,并经消化、离心等一系列步骤后,针对提纯的胰岛细胞应用不同浓度的丝裂霉素进行处理,观察化疗药物对胰岛素分泌及胰岛细胞凋亡的影响,从而为临床上指导化疗期间患者的血糖监测和饮食提供理论依据。方法:健康Wistar雄性大鼠25只,适应性喂养3天禁食10h后,腹腔麻醉无菌条件下,运用胶原酶Ⅴ胆胰管原位灌注法分离胰腺,经37℃水浴恒温震荡消化,Ficoll 400纯化胰岛,后运用解剖显微镜观察并挑取正常胰岛,将大小相似的胰岛每5个一组分组均于RPMI1640(10%胎牛血清)培养基37℃恒温培养1h。后胰岛按照组别分别置于RPMI1640(10%胎牛血清)培养基、含不同浓度丝裂霉素的培养基中分别进行1h、6h、12h、24h 37℃恒温培养。随后各组胰岛按照时间先后顺序分别置于KRBH(葡萄糖浓度:3mmol/L)溶液、KRBH(葡萄糖浓度:15mmol/L)溶液中培养1h,收集培养液上清,-20℃保存,用于测定基础胰岛素及葡萄糖刺激后胰岛素水平,收集胰岛,-80℃保存,用于测定胰岛DNA水平。1胰岛素的测定胰岛素采用放射免疫法测定。2胰岛细胞DNA测定胰岛细胞DNA采用吸附离心法提取,紫外线光吸收度法测定,反应胰岛细胞数目情况。胰岛素与胰岛细胞DNA比值=胰岛素/胰岛细胞DNA的测定用于评价胰岛细胞功能状态。结果:1各大鼠之间体重的比较实验开始时,大鼠随机分组,各组大鼠体重比较无差别,无统计学意义(P>0.05),有可比性。大鼠取材前各组大鼠体重比较无差别,无统计学意义,(P>0.05)。2各组胰岛DNA结果各组胰岛培养1h、6h、12h后,低糖环境下,各组DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,各组DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。各组胰岛培养24h后,低糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组DNA低于0.01mg/mL、0.032mg/mL丝裂霉素组及对照组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下, 0.32mg/mL丝裂霉素组DNA低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),其余各组间DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。在丝裂霉素浓度相同的情况下,低糖环境下,各胰岛DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛培养24hDNA低于培养1h,有统计学意义(P<0.05),其余组DNA比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。3各组胰岛胰岛素与胰岛DNA比值结果各组胰岛培养1h、6h后,低糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。各组胰岛培养12h后,低糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),0.1mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于0.01mg/mL丝裂霉素组及对照组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。各组胰岛培养24h后,低糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),0.1mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL丝裂霉素组及对照组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于其余各组,有统计学意义(P<0.05),0.1mg/mL丝裂霉素组胰岛素与胰岛DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL丝裂霉素组及对照组,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间的比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。对照组、0.01mg/mL、0.032mg/mL丝裂霉素组胰岛,低糖环境下,各组胰岛素与胰岛DNA比值比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,各组胰岛素与胰岛DNA比值比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。0.1mg/mL丝裂霉素组胰岛,低糖环境下,各组胰岛素与胰岛DNA比值比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,培养24h胰岛素与胰岛DNA比值低于培养1h,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间的比较无差别,无统计学意义(P>0.05)。0.32mg/mL丝裂霉素组胰岛,低糖环境下,培养24h胰岛素与胰岛DNA比值低于培养1h、6h,有统计学意义(P<0.05),其余各组之间的比较无差别,无统计学意义(P>0.05);高糖环境下,培养24h胰岛素与胰岛DNA比值低于培养1h、6h、12h,有统计学意义(P<0.05),培养12h胰岛素与胰岛DNA比值低于培养1h、6h,有统计学意义(P<0.05),培养6h胰岛素与胰岛DNA比值低于培养1h,有统计学意义(P<0.05)。结论:1在普通培养基培养的大鼠胰岛细胞随着培养时间的逐渐延长至24h,基础胰岛素及高葡萄糖刺激胰岛素分泌无明显变化,丝裂霉素对胰岛细胞有直接毒性作用,使胰岛素分泌减少。2低、中浓度(0.032mg/mL)丝裂霉素对大鼠胰岛细胞胰岛素的分泌无明显影响,随着丝裂霉素浓度的增加,培养时间的延长,大鼠胰岛细胞基础胰岛素及高葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力均下降,高葡萄糖刺激的胰岛素分泌下降出现更早。3高浓度丝裂霉素刺激可能会诱导胰岛细胞凋亡。