论文部分内容阅读
目的： 明确芩珠凉血方对寻常型银屑病血热证患者和咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的治疗作用以及对Cyr61的调控作用;阐明在银屑病炎性微环境中，芩珠凉血方主要是通过抑制真皮γδT细胞分泌的IL-17，下调Cyr61的表达来改善小鼠银屑病样皮肤炎症。 方法： 第一部分:以正常受试者、寻常型银屑病血热证患者、芩珠凉血方治疗愈显组患者、芩珠凉血方治疗无效组患者皮肤组织为研究对象，Real-time PCR技术检测各组皮肤组织中Cyr61、IL-17、IL-23及IL-6 mRNA表达，Western blot检测各组皮肤组织Cyr61蛋白表达。 第二部分:采用凡士林软膏、咪喹莫特软膏外涂BALB/c小鼠背部和右耳皮肤，芩珠凉血方干预治疗，记录小鼠背部皮损严重程度各项评分（红斑、鳞屑和浸润）以及右耳肿胀程度变化;流式细胞术检测芩珠凉血方对皮肤组织中免疫细胞、炎症细胞和活化T细胞的影响;Real-time PCR技术检测芩珠凉血方对皮肤组织中Cyr61、IL-17、IL-23、TNF-α、IL-6、IL-21和IFN-γ mRNA表达。 第三部分:通过芩珠凉血方含药血清对小鼠角质形成细胞（PAM212）不同情况下的干预作用，检测芩珠凉血方含药血清对小鼠角质形成细胞和Cyr61表达的影响;咪喹莫特软膏外涂小鼠双耳，外延性加入IL-17，通过芩珠凉方干预治疗，观察小鼠耳朵肿胀度变化情况;通过Real-time PCR技术检测外源性IL-17加入后，芩珠凉血方对Cyr61表达的影响，流式细胞术检测IL-17的主要来源。 结果： 1.愈显组患者IL-17、IL-23和IL-6 mRNA表达较治疗前降低，Cyr61基因和蛋白表达水平较治疗前降低。（P＜0.05）。 2.芩珠凉血方治疗组小鼠皮肤组织炎症评分（鳞屑、浸润、总分）、右耳肿胀度轻于模型组（P＜0.05）。 3.治疗组小鼠皮损区CD45+、CD4+CD69+T细胞，树突状细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的数目低于模型组(P＜0.05)。 4.治疗组小鼠皮损区IL-17、IL-23、IL-6、TNF-α和IL-21 mRNA表达较模型组下调，Cyr61基因和蛋白表达水平下调(P＜0.05)。 5.与非含药血清相比，芩珠凉血方含药血清对PAM212细胞增殖和凋亡以及分泌的Cyr61的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。 6.治疗组小鼠耳朵肿胀度轻于模型组(P＜0.05);外延性IL-17加入后，模型组和治疗组小鼠耳朵肿胀度均加重，两者差异无统计学意义(P＞0.05)。 7.芩珠凉血方治疗后，小鼠皮损区Cyr61 mRNA表达低于模型组(P＜0.05);外源性IL-17加入后，两组小鼠Cyr61 mRNA表达均上调，两者差异无统计学意义(P＞0.05)。 8.真皮γδT、CD45+和CD3-CD45+T细胞可以分泌IL-17。芩珠凉血方治疗后，真皮γδT数目较模型组减少(P＜0.05);CD45+细胞、CD3-CD45+T细胞与模型组差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论： 1.芩珠凉血方可以改善寻常型银屑病血热证患者皮肤炎症并下调Cyr61表达。 2.芩珠凉血方可以缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症并下调Cyr61表达。 3.芩珠凉血方通过抑制真皮γδT细胞分泌IL-17下调Cyr61表达，来改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症。