烟碱类农药烯啶虫胺酶联免疫检测方法的建立

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本论文对烟碱类农药烯啶虫胺残留的间接竞争酶联免疫检测方法(icELISA)进行了系统的研究。本实验以烯啶虫胺为原料,用3-巯基丙酸Cl原子取代,从而引入羧基活性基团,成功制备了半抗原。采用活化酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫原和包被原,免疫原免疫大耳白兔以后,成功获得了特异性抗烯啶虫胺的多克隆抗体。通过优化方法工作条件,建立了一种简便、快捷、灵敏的烟碱类农药烯啶虫胺的间接竞争酶联免疫检测方法(icELISA).间接竞争酶联免疫检测方法中包被原的包被浓度为0.05μg/well,抗体的稀释度为1:2000,缓冲液为浓度为0.05 mol L-1的PBS,封闭液为0.5%脱脂乳粉/PBS。此方法的灵敏度(IC50值)为2.18±0.22 ng mL-1,检测限(LOD,以IC15计算)为0.20±0.02 ng mL-1。烯啶虫胺抗体具有良好的特异性,与烟碱类农药吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉的交叉反应率分别是1.49%、0.27%和0.28%,而与其他种类的农药的交叉反应率均低于0.01%。选取4种水样(纯净水、自来水、井水、河水),4种果汁(番茄汁,苹果汁,橙汁,葡萄汁),3种蔬菜(番茄,黄瓜,卷心菜)作为样品,进行了烯啶虫胺的添加回收实验,烯啶虫胺的回收率在62.8%~116.5%之间,板内变异系数为0.9%~9.9%,板间变异系数为1.70%~9.9%。ELISA的检测结果与气相色谱分析法(GC)的检测结果有很好的相关性,两种检测方法检测结果的线性回归方程为y=1.0076x-0.234,相关系数R2=0.9986。以上结果表明本研究建立的ELISA方法具有很高的准确度和精密度。本研究建立的烟碱类农药烯啶虫胺的间接竞争酶联免疫检测方法具有灵敏度高、特异性好、检测快速、检测成本低等优点,适用于水体、果汁和蔬菜样品中烟碱类农药烯啶虫胺残留的快速检测。
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