【摘 要】
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本课题根据已发表的弓形虫P30及GRA2基因序列,自行设计合成一对引物,在引物的5末端适当的位置分别加上限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆方法,在保证其开放读码框
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本课题根据已发表的弓形虫P30及GRA2基因序列,自行设计合成一对引物,在引物的5末端适当的位置分别加上限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆方法,在保证其开放读码框架正确的前提下,使GRA2基因可以定向克隆在P30基因的后面,成功构建了含复合基因的克隆载体(pUC18-P30-GRA2)及表达载体(pTriex4-P30-GRA2).复合表达质粒被转化到处于感受态的JM109大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,表达产物行SDS-PAGE蛋白电泳,初步鉴定其复合表达产物的分子量大小.蛋白泳带经转膜转至硝酸纤维素膜上,进一步行Western-Blot检测,以检测表达蛋白的免疫活性.此复合抗原国内外均未见报道,它为今后抗弓形虫疫苗的研制提供了宝贵的复合型亚单位候选抗原.
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